| 查看: 2724 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
SSR引物退火温度如何确定，求助！
|
|||
|
1、PCR反应体系： Template DNA （50ng/ul） 1ul Taq 0.2ul dNTPs 2ul 10 Buffer 2ul Primer F 1ul R 1ul ddH2O 12.8ul 2、梯度PCR grade 46/58度 3、图片是两个样品DNA、3对引物在梯度PCR下的扩增。其中，第一排从左向右，紧接着第二排从左向右，中间是Marker DL 2000，分别用蓝、绿、粉表示不同的3对引物在8个温度梯度下的扩增效果。 问题： 1、请问这3对引物的最佳退火温度是多少？ 2、3对引物中那一对扩增多态性更好？ 3、有什么需要改进的地方？ 谢谢！  YINWU001001.JPG |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有181人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助，为什么SSR扩增产物琼脂糖跑出的条带会比maker最大分子量还要大呢？？
已经有7人回复
- SSR-PCR求助
已经有21人回复
- 【求助】pcr引物退火温度
已经有9人回复
- 【求助/交流】还是pcr问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR产物的琼脂糖电泳图片
已经有27人回复
- 【求助/交流】PCR--小弟上图了，帮我看看图
已经有33人回复
- 【求助/交流】PCR的若干问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】大家帮忙看看我这个筛退火温度的图，总是拖带
已经有4人回复
- 【求助/交流】pcr p不出特异性条带
已经有13人回复
- 【求助】PCR退火温度及时间如何确定
已经有10人回复
- 【求助/交流】求助~关于引物降解问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】生物小实验求助
已经有5人回复
- 【求助/交流】引物长的话退火温度应该升高还是降低？
已经有6人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
散金祈福
+1/471
-
青岛大学/康复大学导师课题组2026年博士研究生
+3/353
-
泰国排名第一世界排名221位朱拉隆功大学在华招生-在华就读学院正式招生了
+1/86
-
重庆大学刘坤教授课题组招聘等离子体农业应用相关方向科研助理（农学、等离子体、电子
+1/80
-
新加坡国立大学化学系刘小钢教授课题组招收博士生3-4名
+1/77
-
坐标郑州，征女友
+1/45
-
北京航空航天大学-仿生界面材料科学全国重点实验室 康建新 教授招收博士一名
+2/30
-
佛山大学动物科技学院2026年硕士研究生招生调剂公告（第三批）
+1/20
-
求助请教各位:如果您的算法被顶尖院校学术不端怎么办？
+1/11
-
省重点实验室招收调剂生，海洋生物专业，名额充足，可快速安排复试并出结果
+1/7
-
北京理工大学（珠海）招收智能科学与技术方向26级博士
+1/7
-
中科院物理所李泓/吉林大学毛慧灿团队联合诚聘博士后
+1/6
-
山东大学集成电路学院招博士了
+1/5
-
香港科技大学用于先进LCD器件的偏振发射钙钛矿纳米棒增强薄膜
+2/4
-
省重点实验室招收调剂生，海洋生物专业，名额充足，可快速安排复试并出结果
+1/4
-
杭州北航国新院徐梁教授招聘博士（控制/机器视觉/机器人导航操作方向）
+1/4
-
西安工程大学环境与化学工程学院学硕调剂（专硕可调学硕）
+1/2
-
南京大学FinTech大模型实验室招募斯坦福国际联培博士生和博士后及科研助理
+1/2
-
河南城建学院生命科学与工程学院诚招工学专硕，接受跨专业调剂
+1/1
-
中科院地理所招收地理学土地资源学 客座生
+1/1
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-01 15:37:23
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-01 15:37:23
|
引物加一半就好啦！ 其实SSR去追求最适退火温度意义不是很大，我做过很多SSR，一般温度都是56度用，只有在有的特异性非常不好的引物才提高温度，这样感觉才明显，大多引物提高退火温度差异并不明显！ 还有不知你的群体多大，而且SSR相对片段较小，建议你别跑琼脂糖的胶用PAGE。你是怎么读带的？如果你群体很大特异引物也比较多，琼脂糖会很累的！用荧光标记的话多态性不好的引物分析数据时得人为的去掉非特异的带，而且数据不直观，用PAGE统计时是很直观的，是否是特异条带很好看出，这样统计过后可以直接输入电脑用软件分析，荧光的话你还得一个一个看！而且有的引物特异条带并非是主带而是附带，当然你的物种是2倍体的话这种情况会很少的！ |
4楼2012-08-31 09:15:27
2楼2012-08-31 07:09:47
3楼2012-08-31 08:59:08
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-01 15:37:35
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-01 15:37:35
|
SSR一般在100-300是没错的，但是物种不同，分子量也不尽相同，我做的物种很多都是在80左右的。如果低于100很难说明到底是引物二具体还是扩增产物。 其次，如果没有开发SSR引物的物种用其他物种的引物来做，是不知道具体产物大小的。此外，琼脂糖可以用来检测，只是灵敏度低而已。 丙烯酰胺胶是个好建议，但是要看具体差异大小占扩增片段的比例，例如我做过80bp左右的，两个物种差1个bp，可以分开。但是产物300bp，差3个bp就无法分辨。因而，用荧光标记用测序仪来做时最好的选择。 |
5楼2012-08-31 09:47:36
