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sweetjuan

木虫 (小有名气)

[求助] 求助,PCR技术指导

菌液PCR可以扩出来,而且目的条带很单一,但是测序结果却是空载,哪一位可以解释一下吗?我该怎么办?谢谢!
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是菌落PCR还是菌液?是菌落的话可能挑到平板上的未连接的片段了。如果是菌液,就抽个质粒再做一下鉴定好了。
2楼2012-08-30 15:59:51
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sweetjuan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-08-30 15:59:51
是菌落PCR还是菌液?是菌落的话可能挑到平板上的未连接的片段了。如果是菌液,就抽个质粒再做一下鉴定好了。

好的,我再试试看!3Q!
3楼2012-08-31 17:16:05
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sweetjuan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-08-30 15:59:51
是菌落PCR还是菌液?是菌落的话可能挑到平板上的未连接的片段了。如果是菌液,就抽个质粒再做一下鉴定好了。

质粒为模板,PCR结果仍然为单一的目的条带,但是做双酶切时候总是切不开,酶没有问题,但是测序结果仍然为空载体。我不知道为什么?
4楼2012-09-02 20:28:36
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by sweetjuan at 2012-09-02 20:28:36
质粒为模板,PCR结果仍然为单一的目的条带,但是做双酶切时候总是切不开,酶没有问题,但是测序结果仍然为空载体。我不知道为什么?...

能够给我一点更详细的信息吗?比如说什么载体?什么酶?目的基因的来源,菌落PCR引物等。
5楼2012-09-02 21:29:35
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sweetjuan

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-09-02 21:29:35
能够给我一点更详细的信息吗?比如说什么载体?什么酶?目的基因的来源,菌落PCR引物等。...

PCMV-N-flag载体,EcoRI 和Xho I 目的基因来源于狂犬病毒的蛋白基因
6楼2012-09-03 14:37:57
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by sweetjuan at 2012-09-03 14:37:57
PCMV-N-flag载体,EcoRI 和Xho I 目的基因来源于狂犬病毒的蛋白基因...

既然测序都是空载了,那就只能重新做了。菌落PCR时选择一条来自载体,一条来自目的基因的引物,这样出现假阳性的几率会很小,基本能排除了!
7楼2012-09-03 18:38:08
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