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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 脂氧合酶活性的测定的问题（葡萄）
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iristeng

新虫 (初入文坛)

[求助] 脂氧合酶活性的测定的问题（葡萄） 已有1人参与

各位大侠 我是测葡萄各组织器官的脂氧合酶 提取缓冲液用的是磷酸缓冲液（PH6.8 50mmol/L) ,其中含有1%的TritonX-100和4%PVP。
提取酶液的时候忘记预冷缓冲液了（这个关系大吗？）
反应缓冲液是醋酸缓冲液（pH5.4  100mmol/L）
反应底物亚油酸（0.5%V/V），其中加了Tween-20，并滴加了NaOH

测酶活时用的就是经典的3mL反应体系(但是我的样品有限，我就把体系缩到了1mL),由于现在是夏季，我没有预热（30℃）缓冲液和底物，在234nm处测定1分钟内的吸光值，完全没有变化，哪位大侠遇到过类似情况 请指点下 看看是哪一步出了问题 是酶液太少没反应还是很快反应完了所以没变化？？？
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1楼 2012-08-29 22:22:37
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hellen1987

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by koalarola at 2012-11-02 23:13:05
请问你的亚油酸底物是如何溶解的？我买的亚油酸是固体，用了含有吐温20的脱氧双蒸水还是溶解不了。。。...

可以先溶解在无水乙醇里，之后加吐温20，混匀后再旋蒸除去乙醇，然后再溶解在相应缓冲体系里
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7楼2012-11-20 20:43:21
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iristeng

新虫 (初入文坛)
自己顶一下吧~谁帮帮我啊
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2楼2012-08-30 21:10:23
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 经验之谈，值得借鉴 2012-08-31 18:20:02
首先测定的时候必须将缓冲液预热到测定温度，其次是你可以将反应读数时间设定的时间间隔调节为每10或者20秒读数一次，看看有没有读数变化，这样做的话再没有读数变化的话就要考虑是否有酶活或者是测定方法的适宜与否了
这是我从测定很多酶活的过程中得出的结论，希望对你及很多测定酶活遇到难题的人有帮助。
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3楼2012-08-31 09:57:34
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 有这个可能 2012-08-31 18:20:20
最大的原因是酶没有提取出来，即使不是最佳条件也应该显示一点活性吧，要不加大酶量看看 如果还没有效果 则重新提取酶 或者购买酶来验证 祝福你i了
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4楼2012-08-31 12:01:08
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