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漫天流萤

新虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌转化

本人使用的是电转,转进去的质粒带有卡那霉素抗性,转完以后用含100mg/L的卡纳LB板涂匀,长出菌落后,挑单菌落做菌落PCR,为神马显示不出阳性?
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漫天流萤

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by anyanqiu at 2012-08-28 22:27:02
不是很明白你的问题,如果你是在载体上连接了目的片段的话,出现这种问题,可能是你挑的菌落是空载体,就是没有连接上目的片段,可以多挑写菌落进行验证。因为你的空载体和转入目的片段的载体均有卡纳抗性,所以在卡 ...

不是,我的载体是从菌落PCR阳性的菌里提出来,然后又进行了质粒PCR,验证出来有了以后,才做的转化。
6楼2012-08-29 10:45:29
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那就是说你转的都是空载体啊,没有连接上啊
总有一天我要修改用户名。
2楼2012-08-28 22:04:12
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漫天流萤

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 137167741 at 2012-08-28 22:04:12
那就是说你转的都是空载体啊,没有连接上啊

但是载体在转化之前PCR验证过的呀。
3楼2012-08-28 22:05:02
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anyanqiu

银虫 (初入文坛)

不是很明白你的问题,如果你是在载体上连接了目的片段的话,出现这种问题,可能是你挑的菌落是空载体,就是没有连接上目的片段,可以多挑写菌落进行验证。因为你的空载体和转入目的片段的载体均有卡纳抗性,所以在卡纳平板上长出的菌落空载体的会占据绝大部分
4楼2012-08-28 22:27:02
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