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漫天流萤

新虫 (小有名气)

[求助] 关于大肠杆菌转化

本人使用的是电转,转进去的质粒带有卡那霉素抗性,转完以后用含100mg/L的卡纳LB板涂匀,长出菌落后,挑单菌落做菌落PCR,为神马显示不出阳性?
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 漫天流萤 at 2012-08-28 22:05:02
但是载体在转化之前PCR验证过的呀。...

怎么验证的啊?pcr吗?没有连接上,不是照样可以检测出来吗?反正都在一个管子里。
总有一天我要修改用户名。
5楼2012-08-29 08:49:12
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那就是说你转的都是空载体啊,没有连接上啊
总有一天我要修改用户名。
2楼2012-08-28 22:04:12
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漫天流萤

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 137167741 at 2012-08-28 22:04:12
那就是说你转的都是空载体啊,没有连接上啊

但是载体在转化之前PCR验证过的呀。
3楼2012-08-28 22:05:02
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anyanqiu

银虫 (初入文坛)

不是很明白你的问题,如果你是在载体上连接了目的片段的话,出现这种问题,可能是你挑的菌落是空载体,就是没有连接上目的片段,可以多挑写菌落进行验证。因为你的空载体和转入目的片段的载体均有卡纳抗性,所以在卡纳平板上长出的菌落空载体的会占据绝大部分
4楼2012-08-28 22:27:02
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