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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PRC出现大量非特异性条带
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Viegour

新虫 (初入文坛)

[交流] PRC出现大量非特异性条带 已有8人参与

做700多的PCR，出现的非特异性条带比特异性的还亮，咋整呢……
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1楼 2012-08-28 14:53:26
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
出现非特异性条带主要还是引物设计问题。但是在不改变引物的前提下，还是可能试着通过减少循环数同时增加模板量以及提高退火温度等方式解决问题。
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8楼2012-08-29 09:06:41
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yaolinlshang

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的实验也是这样。
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最是人间留不住，朱颜辞镜花辞树！
2楼2012-08-28 15:21:57
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三十不惑

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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amisking: 回帖置顶 2012-08-28 19:39:54
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-28 19:40:02
我也碰到过，排除了很多问题，最终也没找到确切的原因，最后还是无奈换了引物，就没问题了。由此分析应该还是引物本身的问题，或者多个结合位点，或者非特异结合，也可能是引物自身出现多聚。我也对PCR结果进行了测序，就使用了PCR引物，但是测序公司说不能结合测不出来。我对这个问题也非常好奇，如果你能找到原因，一定要告诉我呵呵。
目前看来要想解决问题，最有效的还是直接更换引物。
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个性签名
3楼2012-08-28 15:36:28
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616057157

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看看Tap酶的量，主要是引物和退火温度的问题
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不曾拥有何谈失去，不必伤心！！！
4楼2012-08-28 16:02:03
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