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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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傻饭

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[交流] western blot 已有4人参与

SDS-PAGE能够跑出目的条带,可western blot却跑不出目的条带,恳请各位前辈指点迷津。万分感激。
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傻并快乐着
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tanglian8655

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这个问题问的有点笼统哦
需要摸索反应条件,分析你的蛋白是否转到膜上了,抗体的特异性是否良好等
2楼2012-08-28 13:13:26
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lidonghong

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是啊 ,你的问题太模糊了 ,说的可以再仔细点不咯!!
生物化学与分子生物学
3楼2012-08-28 17:00:37
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jl860822

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


把你的实验条件讲一下,这样才能具体分析
4楼2012-08-29 08:37:23
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linatracy

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
WB反应是很灵敏的,量很少就可以有反应,在确保实验操作全部正确的情况下,有可能你的目的蛋白没有反应活性。
5楼2012-08-29 17:44:05
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傻饭

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by tanglian8655 at 2012-08-28 13:13:26
你这个问题问的有点笼统哦
需要摸索反应条件,分析你的蛋白是否转到膜上了,抗体的特异性是否良好等

转膜的时间、电流;一二抗的浓度都摸索了。依旧不行。
傻并快乐着
6楼2012-09-06 20:51:21
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傻饭

兑换贵宾

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

我在做原核表达的时候,分别从IPTG浓度、时间、温度三方面对表达条件进行了优化,SDS检测,通过分子量及蛋白表达量的变化确定我的目的蛋白正确。但做到WB的时候,我的目的蛋白无论如何也转不到膜上。膜上出来的条带都是杂带,没有我的目的带。
傻并快乐着
7楼2012-09-06 20:55:52
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傻饭

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
5楼: Originally posted by linatracy at 2012-08-29 17:44:05
WB反应是很灵敏的,量很少就可以有反应,在确保实验操作全部正确的情况下,有可能你的目的蛋白没有反应活性。

我的是跨膜蛋白,有信号肽,扩膜结构。是否这些对表达有影响?
傻并快乐着
8楼2012-09-06 20:56:56
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傻饭

版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

说的再直接一点就是:SDS的时候有目的带,大小为55.但WB的时候,55带没有,只有55以下的带。但marker170的带都有,所以我排除了转膜时间过短的问题。
傻并快乐着
9楼2012-09-06 20:59:13
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tanglian8655

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 傻饭 at 2012-09-06 20:51:21
转膜的时间、电流;一二抗的浓度都摸索了。依旧不行。...

那你的抗原和抗体呢?
10楼2012-09-06 21:30:03
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