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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么蛋白放置一周从50KD条带变成30KD条带呢
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lepapillon7

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么蛋白放置一周从50KD条带变成30KD条带呢

我纯化蛋白以后，将蛋白透析到PBS缓冲液，4度放置。一周以后拿出来做实验，跑胶结果发现蛋白从原来的50KD 变成了30KD，请问这是为什么呢。我应该如何改进呢，谢谢。
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1楼 2012-08-23 23:23:21
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加蛋白酶抑制剂。我在任何样品中都加蛋白酶抑制剂，因为微量的污染都会造成蛋白质降解，特别是这种长期溶液保存的。
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2楼2012-08-24 05:28:27
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-24 13:49:17
那你的蛋白应该是降解了。
一般蛋白隔夜都要加保护剂的，何况是一周。
像你这种情况就应该透析之后就冻存起来，加10%甘油，5mM DTT，-80℃冻存。
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3楼2012-08-24 09:53:32
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wangjing1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降解了，或者是好几个亚基一起分开了
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4楼2012-08-26 20:02:14
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angel_yy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-30 14:25:14
应该是降解了，虽然蛋白质相对比较稳定，但是环境和一些仪器上会存在蛋白酶的 所以最好的方法是现做现用，这样既不用考虑讲解 也不用考虑加入的抑制剂的影响
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5楼2012-08-29 23:55:12
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