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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR反应中的奇特条带
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匿名

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1楼2012-08-23 15:14:11
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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wg0541001: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-24 08:47:25
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:45:59
楼主的引物是特异的嘛？
你的目标带是从什么物种来的，是否跟载体有同源？
最好的办法是测个序就晓得了。
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2楼2012-08-23 21:47:45
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匿名

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3楼2012-08-24 08:47:17
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liuwt2008

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为引物特异性不好。
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4楼2012-08-25 17:54:37
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yuer9809

至尊木虫 (著名写手)
非目的条带比目的条带还亮这么多
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5楼2012-08-25 18:51:17
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实心小白菜

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液PCR用的不是应该是载体上的通用引物么？怎么会出现这么强的非特异结合呢？
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有啥不高兴的事儿，说出来大家乐呵乐呵~
6楼2012-08-25 19:26:36
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jjg0912

木虫 (正式写手)
呵呵，看上去目的条带成了非特异扩增了。
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7楼2012-08-26 05:20:08
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jjg0912

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wg0541001: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-08-26 07:51:42
你把延伸时间设置的精确一些，而且提高退火温度，你可以用一下梯度降落PCR以提高特异性。
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8楼2012-08-26 05:23:05
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wg0541001: 金币+5 2012-08-26 10:56:20
第一，可以测序一下看看到底是什么序列
第二、可以提取质粒，然后再pcr鉴定一下，看是否是载体上的序列
第三、推测有可能是细菌基因组而非质粒上的序列
第四、楼主的引物貌似特异性不怎么好
第五、pcr的延伸时间可以设置短一些，上面那条带比下面的大很多的
希望可以帮助到你~~~
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总有一天我要修改用户名。
9楼2012-08-26 07:53:54
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