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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] SDS PAGE 小肽?

大家好:
由于以前对小肽不了解,所以跑电泳遇到了问题,下面是我的电泳图,Marker最小的带是14kd,我的蛋白是5kd多,我的问题是,小肽超过了分离胶的分辨范围,是完全不会显示条带吗?换一种说法就是,单凭我的图是否能确定我的蛋白有没有诱导出来吗?我转化用的是毕赤酵母,所以没什么分泌杂蛋白。 希望有大神能帮我。。。另外有关于小肽电泳的资料(Tricine sds page之类的),希望发我一份,谢谢了
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同意楼上说法,你可以用45%的丙烯酰胺,然后跑tricine胶 专门跑10KD以下的蛋白  效果较好
参考http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/full/nprot.2006.4.html
8楼2012-08-24 09:09:51
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
好像是分子量小的跑的快,那你的胶最上面的那条14KD,5KD的早出去了。能不能缩短电泳时间?
2楼2012-08-22 08:14:27
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-22 18:12:46
5K多的分子量,我还是建议使用液相色谱,然后确定差不多了在进行液相的制备,分离出来你想要的组分,然后做MALDI-TOF看看是不是你想要的序列,分子量对的上再做个氨基酸序列分析就好了,你的肽分子量太小了,能问一下表达的是什么啊?是用的质粒表达吗?
索马鲁肽,利拉鲁肽,德谷胰岛素,InsulinIcodec胰岛素侧链,发酵索玛/利拉直链热卖
3楼2012-08-22 09:51:36
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wtery

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-08-22 18:12:52
5K的蛋白太小了,一般15%的胶也只能分到10k,你的蛋白可能比溴酚蓝跑的还快,早就出去了,
你可以试试,跑到一半就停,可能在下面能找到你的蛋白,
4楼2012-08-22 17:42:23
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