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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS PAGE 小肽？
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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] SDS PAGE 小肽？

大家好：
由于以前对小肽不了解，所以跑电泳遇到了问题，下面是我的电泳图，Marker最小的带是14kd，我的蛋白是5kd多，我的问题是，小肽超过了分离胶的分辨范围，是完全不会显示条带吗？换一种说法就是，单凭我的图是否能确定我的蛋白有没有诱导出来吗？我转化用的是毕赤酵母，所以没什么分泌杂蛋白。 希望有大神能帮我。。。另外有关于小肽电泳的资料（Tricine sds page之类的），希望发我一份，谢谢了
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1楼2012-08-22 07:04:49
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-22 18:12:46
5K多的分子量，我还是建议使用液相色谱，然后确定差不多了在进行液相的制备，分离出来你想要的组分，然后做MALDI-TOF看看是不是你想要的序列，分子量对的上再做个氨基酸序列分析就好了，你的肽分子量太小了，能问一下表达的是什么啊?是用的质粒表达吗？
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3楼2012-08-22 09:51:36
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)
★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-09-04 17:41:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by wizardfan at 2012-08-23 05:58:57
5K做LC-MS是不是有点偏大？...

不是做LC-MS，我那天说的意思是：是先做HPLC分析一下，看看里面的情况，可不可以纯化一下再做MALDI-TOF，另外MALDI-TOF是不可以和LC连用的，ESI什么的是可以喝LC连用，所以叫LC-MS，而MALDI-TOF是要和基质一起结晶到靶上，然后用激光辅助电离的，而且5KD的分子量走HPLC没什么问题
或者说是LC-MS也行，基本上就是给你做成多电荷峰，也就是说是1/3峰，1/4峰，这样的话你在算回去就行了
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9楼2012-08-24 13:39:24
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wizardfan at 2012-08-24 16:53:29
LC-MS是液相质谱，液相起到分离的作用，MS起到检测的作用。
在MS里，ESI,MALDI是ionizer，就是两种不同的方法，TOF和TRAP是不同的detector，这样理论上说就有4种MS,都可以和LC联用。而不是像你所说的那样。...

我说的是MALDI-TOF不能和LC联用，并不是说TOF检测器不能和LC联用，我已经说的很清楚了是MALDI-TOF，已经强调了离子化的方法是MALDI（基质辅助激光解吸附质谱技术）了，TOF是检测器也知道，是飞行时间质谱，所以说你根本就没明白我要说的主要意思，他的分子量都5KD乐，要是想得到单电荷的分子离子峰做MALDI-TOF会好一点，况且要是做粗品的话你使用其他的质谱仪的话做出来很多多电荷峰你怎么看啊，看着不眼晕啊
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12楼2012-08-24 17:27:15
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by wizardfan at 2012-08-25 01:21:06
是你没有明白我的意思，LC可以和MALTI TOF联用！！
不相信的话，去pubmed搜 lc ms malti tof，有一串文献。
例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22808953   were quantified by LC-MALDI TOF/TOF MS...

还是发一个有关于质谱的ppt吧，大家也就不用为这些争论不休了，真不想再说这些问题了
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14楼2012-08-27 09:17:57
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