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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS PAGE 小肽？
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windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] SDS PAGE 小肽？

大家好：
由于以前对小肽不了解，所以跑电泳遇到了问题，下面是我的电泳图，Marker最小的带是14kd，我的蛋白是5kd多，我的问题是，小肽超过了分离胶的分辨范围，是完全不会显示条带吗？换一种说法就是，单凭我的图是否能确定我的蛋白有没有诱导出来吗？我转化用的是毕赤酵母，所以没什么分泌杂蛋白。 希望有大神能帮我。。。另外有关于小肽电泳的资料（Tricine sds page之类的），希望发我一份，谢谢了
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1楼2012-08-22 07:04:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意楼上说法，你可以用45%的丙烯酰胺，然后跑tricine胶 专门跑10KD以下的蛋白  效果较好
参考http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/full/nprot.2006.4.html
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8楼2012-08-24 09:09:51
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普通回帖

wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
好像是分子量小的跑的快，那你的胶最上面的那条14KD,5KD的早出去了。能不能缩短电泳时间？
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2楼2012-08-22 08:14:27
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-08-22 18:12:46
5K多的分子量，我还是建议使用液相色谱，然后确定差不多了在进行液相的制备，分离出来你想要的组分，然后做MALDI-TOF看看是不是你想要的序列，分子量对的上再做个氨基酸序列分析就好了，你的肽分子量太小了，能问一下表达的是什么啊?是用的质粒表达吗？
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索马鲁肽，利拉鲁肽，德谷胰岛素，InsulinIcodec胰岛素侧链，发酵索玛/利拉直链热卖
3楼2012-08-22 09:51:36
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wtery

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-08-22 18:12:52
5K的蛋白太小了，一般15%的胶也只能分到10k，你的蛋白可能比溴酚蓝跑的还快，早就出去了，
你可以试试，跑到一半就停，可能在下面能找到你的蛋白，
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4楼2012-08-22 17:42:23
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 悠悠落叶 at 2012-08-22 09:51:36
5K多的分子量，我还是建议使用液相色谱，然后确定差不多了在进行液相的制备，分离出来你想要的组分，然后做MALDI-TOF看看是不是你想要的序列，分子量对的上再做个氨基酸序列分析就好了，你的肽分子量太小了，能问一 ...

5K做LC-MS是不是有点偏大？
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5楼2012-08-23 05:58:57
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yyk81

木虫 (正式写手)
用你现在的方法肯定跑不出来，你需要改变丙烯酰胺和双丙烯酰胺的比值，捉高交连度，还要用三层胶。跟距我的提示，你自己查一下，要享受查找的过程。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学无止境！
6楼2012-08-24 08:03:54
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yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用你现在的方法肯定跑不出来，你需要改变丙烯酰胺和双丙烯酰胺的比值，捉高交连度，还要用三层胶。跟距我的提示，你自己查一下，要享受查找的过程。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学无止境！
7楼2012-08-24 08:04:20
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悠悠落叶

金虫 (正式写手)
★ ★
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-09-04 17:41:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by wizardfan at 2012-08-23 05:58:57
5K做LC-MS是不是有点偏大？...

不是做LC-MS，我那天说的意思是：是先做HPLC分析一下，看看里面的情况，可不可以纯化一下再做MALDI-TOF，另外MALDI-TOF是不可以和LC连用的，ESI什么的是可以喝LC连用，所以叫LC-MS，而MALDI-TOF是要和基质一起结晶到靶上，然后用激光辅助电离的，而且5KD的分子量走HPLC没什么问题
或者说是LC-MS也行，基本上就是给你做成多电荷峰，也就是说是1/3峰，1/4峰，这样的话你在算回去就行了
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索马鲁肽，利拉鲁肽，德谷胰岛素，InsulinIcodec胰岛素侧链，发酵索玛/利拉直链热卖
9楼2012-08-24 13:39:24
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主
引用回帖:
9楼: Originally posted by 悠悠落叶 at 2012-08-24 13:39:24
不是做LC-MS，我那天说的意思是：是先做HPLC分析一下，看看里面的情况，可不可以纯化一下再做MALDI-TOF，另外MALDI-TOF是不可以和LC连用的，ESI什么的是可以喝LC连用，所以叫LC-MS，而MALDI-TOF是要和基质一起结晶 ...

LC-MS是液相质谱，液相起到分离的作用，MS起到检测的作用。
在MS里，ESI,MALDI是ionizer，就是两种不同的方法，TOF和TRAP是不同的detector，这样理论上说就有4种MS,都可以和LC联用。而不是像你所说的那样。
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10楼2012-08-24 16:53:29
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