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lixilei1314

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切后目的条带的疑问?

如何:
小弟最近在做重组质粒的双酶切,然后连接。
1,连接以后转化BL21培养基筛选,老是不长细菌,基本上平板上一个细菌都不长,不知道是什么原因?没连接好?
2,看我双酶切的条带,PET-28双酶切之后条带很暗很暗(3ul的上样量),同样,第一个和第二个的目的条带也很暗,第三个目的条带比较亮。请问各位大侠这样的条带可以割胶回收做连接吗?
3, 为什么双酶切之后,克隆载体亮度会比目的条带的亮度亮很多呢?按说他们的浓度应该是一样的啊?
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安琪儿水晶

金虫 (正式写手)

我的双酶切切除来是载体片段稍大,目地片段较小,怎么回事?而且单酶切和双酶切切出来一样的效果。但是用重组菌做pcr可以扩出目的条带,这是怎么回事?

20130118扩增酶连产物.jpg



20130306top酶切.jpg

相信自己,总会好的!
8楼2013-03-08 15:19:35
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