2楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 14:32:39
蛋白析出？沉淀吧。
上柱之前没有变化吗？

3楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-21 15:45:36
是啊 上柱子之前没有沉淀啊 愁人呢...

4楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 16:26:38
你的GST柱子上样之前，用buffer平衡了吗？
还有，温度是和透析之后温度一样吗？
你的沉淀是洗脱时候沉淀的吧？洗脱的buffer pH是要和上样一样的哦，不然就沉淀了。...

5楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-21 19:03:59
上柱子前平衡了，温度是室温，透析时温度是4度，这个影响大吗？我说的沉淀是上样的时候在柱子里就沉淀了，从而未挂到柱子上，还没做到洗脱那一步的。看来您很懂这方面，多请教您了。还有您做过GST纯化时，分子伴侣 ...

6楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-22 08:45:16
看你的描述，柱子可能有变性剂没洗掉，洗彻底再平衡。
温度的原因。我觉得蛋白是要温柔对待的，特别是变复性之后的，呵呵，你可以用在冰上预冷的buffer去平衡柱子，最好能在4℃冰库或者血液冷藏箱里操作。
分子伴 ...

7楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-22 09:43:45
柱子可能是没洗干净，值得考虑的建议。我们科室没有4度冰库或冷藏箱，所以很难维持低温的环境。分子伴侣是我在做蛋白可溶性蛋白GST纯化时出现的，为了蛋白的纯度，必须除去和融合蛋白结合在一起的分子伴侣，呵呵， ...