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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 包涵体 复性

请教亲们一个问题:包涵体变性复性后为什么挂GST柱子时蛋白就析出了呢?
变性液:8M尿素,
复性:4度透析复性 8M-6M-4M-2M-1M-0.5M尿素-PBS,复性液中含有L-精氨酸,氧化型和还原型谷胱甘肽。
为什么进行GST纯化挂柱时蛋白就析出来了呢?
急求 请教亲们 有金币答谢
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consist10

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-22 08:45:16
看你的描述,柱子可能有变性剂没洗掉,洗彻底再平衡。
温度的原因。我觉得蛋白是要温柔对待的,特别是变复性之后的,呵呵,你可以用在冰上预冷的buffer去平衡柱子,最好能在4℃冰库或者血液冷藏箱里操作。
分子伴 ...

柱子可能是没洗干净,值得考虑的建议。我们科室没有4度冰库或冷藏箱,所以很难维持低温的环境。分子伴侣是我在做蛋白可溶性蛋白GST纯化时出现的,为了蛋白的纯度,必须除去和融合蛋白结合在一起的分子伴侣,呵呵,实在不行,就考虑换表达载体了,不过,O(∩_∩)O谢谢!请问您有包涵体纯化的步骤吗?参考别人做的,看自己问题在哪里。
7楼2012-08-22 09:43:45
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白析出?沉淀吧。
上柱之前没有变化吗?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-08-21 14:32:39
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consist10

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 14:32:39
蛋白析出?沉淀吧。
上柱之前没有变化吗?

是啊 上柱子之前没有沉淀啊 愁人呢
3楼2012-08-21 15:45:36
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
consist10: 金币+5 2012-08-21 19:04:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-21 15:45:36
是啊 上柱子之前没有沉淀啊 愁人呢...

你的GST柱子上样之前,用buffer平衡了吗?
还有,温度是和透析之后温度一样吗?
你的沉淀是洗脱时候沉淀的吧?洗脱的buffer pH是要和上样一样的哦,不然就沉淀了。
4楼2012-08-21 16:26:38
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