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consist10

金虫 (正式写手)

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[求助] 包涵体复性

请教亲们一个问题：包涵体变性复性后为什么挂GST柱子时蛋白就析出了呢？
变性液：8M尿素，
复性：4度透析复性 8M-6M-4M-2M-1M-0.5M尿素-PBS，复性液中含有L-精氨酸，氧化型和还原型谷胱甘肽。
为什么进行GST纯化挂柱时蛋白就析出来了呢？
急求请教亲们有金币答谢

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1楼 2012-08-21 13:42:11

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consist10

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引用回帖:

6楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-22 08:45:16
看你的描述，柱子可能有变性剂没洗掉，洗彻底再平衡。
温度的原因。我觉得蛋白是要温柔对待的，特别是变复性之后的，呵呵，你可以用在冰上预冷的buffer去平衡柱子，最好能在4℃冰库或者血液冷藏箱里操作。
分子伴 ...

柱子可能是没洗干净，值得考虑的建议。我们科室没有4度冰库或冷藏箱，所以很难维持低温的环境。分子伴侣是我在做蛋白可溶性蛋白GST纯化时出现的，为了蛋白的纯度，必须除去和融合蛋白结合在一起的分子伴侣，呵呵，实在不行，就考虑换表达载体了，不过，O(∩_∩)O谢谢！请问您有包涵体纯化的步骤吗？参考别人做的，看自己问题在哪里。