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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 包涵体 复性

请教亲们一个问题:包涵体变性复性后为什么挂GST柱子时蛋白就析出了呢?
变性液:8M尿素,
复性:4度透析复性 8M-6M-4M-2M-1M-0.5M尿素-PBS,复性液中含有L-精氨酸,氧化型和还原型谷胱甘肽。
为什么进行GST纯化挂柱时蛋白就析出来了呢?
急求 请教亲们 有金币答谢
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
consist10: 金币+3, 有帮助 2012-08-22 09:40:17
引用回帖:
5楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-21 19:03:59
上柱子前平衡了,温度是室温,透析时温度是4度,这个影响大吗?我说的沉淀是上样的时候在柱子里就沉淀了,从而未挂到柱子上,还没做到洗脱那一步的。看来您很懂这方面,多请教您了。还有您做过GST纯化时,分子伴侣 ...

看你的描述,柱子可能有变性剂没洗掉,洗彻底再平衡。
温度的原因。我觉得蛋白是要温柔对待的,特别是变复性之后的,呵呵,你可以用在冰上预冷的buffer去平衡柱子,最好能在4℃冰库或者血液冷藏箱里操作。
分子伴侣说实话了解不多,不过分子伴侣是在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装,所以,我觉得没必要去掉。
多交流啊。
6楼2012-08-22 08:45:16
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白析出?沉淀吧。
上柱之前没有变化吗?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-08-21 14:32:39
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consist10

金虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 14:32:39
蛋白析出?沉淀吧。
上柱之前没有变化吗?

是啊 上柱子之前没有沉淀啊 愁人呢
3楼2012-08-21 15:45:36
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
consist10: 金币+5 2012-08-21 19:04:28
引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-21 15:45:36
是啊 上柱子之前没有沉淀啊 愁人呢...

你的GST柱子上样之前,用buffer平衡了吗?
还有,温度是和透析之后温度一样吗?
你的沉淀是洗脱时候沉淀的吧?洗脱的buffer pH是要和上样一样的哦,不然就沉淀了。
4楼2012-08-21 16:26:38
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