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consist10

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 728
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专业: 黏膜免疫疾病

[求助] 包涵体复性

请教亲们一个问题：包涵体变性复性后为什么挂GST柱子时蛋白就析出了呢？
变性液：8M尿素，
复性：4度透析复性 8M-6M-4M-2M-1M-0.5M尿素-PBS，复性液中含有L-精氨酸，氧化型和还原型谷胱甘肽。
为什么进行GST纯化挂柱时蛋白就析出来了呢？
急求请教亲们有金币答谢

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1楼 2012-08-21 13:42:11

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

BioEPI: 9
应助: 237 (大学生)
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性别: GG
专业: 污染控制化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
consist10: 金币+3, ★有帮助 2012-08-22 09:40:17

引用回帖:

5楼: Originally posted by consist10 at 2012-08-21 19:03:59
上柱子前平衡了，温度是室温，透析时温度是4度，这个影响大吗？我说的沉淀是上样的时候在柱子里就沉淀了，从而未挂到柱子上，还没做到洗脱那一步的。看来您很懂这方面，多请教您了。还有您做过GST纯化时，分子伴侣 ...

看你的描述，柱子可能有变性剂没洗掉，洗彻底再平衡。
温度的原因。我觉得蛋白是要温柔对待的，特别是变复性之后的，呵呵，你可以用在冰上预冷的buffer去平衡柱子，最好能在4℃冰库或者血液冷藏箱里操作。
分子伴侣说实话了解不多，不过分子伴侣是在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装，所以，我觉得没必要去掉。
多交流啊。