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ljw0931

金虫 (小有名气)

[求助] 第一次跑PCR,很不理想,请各位同仁指教!

1%琼脂糖凝胶电泳,110v下跑了50min,跑出去了,但是扩增的带不亮,请指教?
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+3, 回答很好 2012-08-21 07:24:19
首先电泳应该没问题吧,加样的时候应该没有手抖吧,110v high了50分钟,有点浪费国家资源的嫌疑
PCR扩增不亮考虑3个方面的问题
1、模板是否纯净,蛋白、其他非目的核酸或盐尽量少
2、引物是否特异,
3、扩增时退火温度是否合适
最后,还是建议多看书,多问师兄师姐,这是捷径中的捷径!
Bless you!
2楼2012-08-21 00:05:34
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mmlzhang

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-21 16:26:06
多大的片段,跑这么久,一般1kb也就跑15min就差不多了
PCR扩增不量主要是你的引物特异性不好,退火温度调低一点,在检查一下你的模板浓度,产物片段大的可以试试用好一点的DNA聚合酶。
心有多宽,路就有多宽
3楼2012-08-21 12:07:09
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此日木草

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
真是下了狠劲跑的,呵呵,时间太长了吧?PCR做的不好才不亮的吧,不知道有没有用MIX可以减少污染与误差
4楼2012-08-21 15:57:29
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