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ljw0931

金虫 (小有名气)

[求助] 第一次跑PCR，很不理想，请各位同仁指教！

1%琼脂糖凝胶电泳，110v下跑了50min，跑出去了，但是扩增的带不亮，请指教？
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1楼 2012-08-20 23:42:11
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+3, 回答很好 2012-08-21 07:24:19
首先电泳应该没问题吧，加样的时候应该没有手抖吧，110v high了50分钟，有点浪费国家资源的嫌疑
PCR扩增不亮考虑3个方面的问题
1、模板是否纯净，蛋白、其他非目的核酸或盐尽量少
2、引物是否特异，
3、扩增时退火温度是否合适
最后，还是建议多看书，多问师兄师姐，这是捷径中的捷径！
Bless you！
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2楼2012-08-21 00:05:34
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mmlzhang

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-21 16:26:06
多大的片段，跑这么久，一般1kb也就跑15min就差不多了
PCR扩增不量主要是你的引物特异性不好，退火温度调低一点，在检查一下你的模板浓度，产物片段大的可以试试用好一点的DNA聚合酶。
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心有多宽，路就有多宽
3楼2012-08-21 12:07:09
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此日木草

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
真是下了狠劲跑的，呵呵，时间太长了吧？PCR做的不好才不亮的吧，不知道有没有用MIX可以减少污染与误差
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4楼2012-08-21 15:57:29
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