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双向电泳 超滤还是透析 已有2人参与
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各位双向电泳的高手，我几个关于样品处理的问题想咨询大家 1、双向电泳对样品浓度有要求吗？我的大概是50mg/l 2、双向电泳对样品中的盐要求高吗？是绝对无盐还是有一定阈值的呀？ 3、可以用超滤进行脱盐吗？超滤后有缓冲液洗脱还是直接用去离子水？如果用缓冲液的话，缓冲液也含盐离子怎么办？ 4、如果用透析，透析液用水还是缓冲液？缓冲液也是含盐的呀？ 第一次做，实在不懂，望大家多多帮忙，谢谢！ |
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minimouse
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silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2012-08-13 07:57:10
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silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2012-08-13 07:57:10
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不是高手 1、双向电泳对样品浓度有要求吗？我的大概是50mg/l 对浓度没有要求，你可以参考第一相等点聚焦的上样量进行考虑。第一相等点聚焦的上样量可以去参看GE的固相等点聚焦产品手册，不知道你的是打算跑什么pH范围的，是3-11的还是4-7的？ 2、双向电泳对样品中的盐要求高吗？是绝对无盐还是有一定阈值的呀？ 不要求无盐，但是盐离子浓度要低，因为盐离子浓度太高电压上不去，平衡的时间会很长，而且效果也不好 3、可以用超滤进行脱盐吗？超滤后有缓冲液洗脱还是直接用去离子水？如果用缓冲液的话，缓冲液也含盐离子怎么办？ 最好是用水吧，如果出于蛋白稳定性考虑，需要采用缓冲液来稳定pH值的，拿缓冲液盐离子浓度低些也行。比如10mM之类的浓度，影响不大 4、如果用透析，透析液用水还是缓冲液？缓冲液也是含盐的呀？ 这个同3 第一次做，实在不懂，望大家多多帮忙，谢谢！ |
4楼2012-08-10 16:30:35
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