24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 740  |  回复: 4
本帖产生 1 个 BioEPI ,点击这里进行查看

jialemon

新虫 (初入文坛)

[交流] 双向电泳 超滤还是透析 已有2人参与

各位双向电泳的高手,我几个关于样品处理的问题想咨询大家
1、双向电泳对样品浓度有要求吗?我的大概是50mg/l
2、双向电泳对样品中的盐要求高吗?是绝对无盐还是有一定阈值的呀?
3、可以用超滤进行脱盐吗?超滤后有缓冲液洗脱还是直接用去离子水?如果用缓冲液的话,缓冲液也含盐离子怎么办?
4、如果用透析,透析液用水还是缓冲液?缓冲液也是含盐的呀?
第一次做,实在不懂,望大家多多帮忙,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

五行剑客

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-08-12 13:37:37
我只能回答你第3个问,超滤后得先用低浓度的氢氧化钠再用去离子水。
天行健,君子以自强不息!
2楼2012-08-10 10:17:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jialemon

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 五行剑客 at 2012-08-10 10:17:20
我只能回答你第3个问,超滤后得先用低浓度的氢氧化钠再用去离子水。

为什么要用氢氧化钠啊?蛋白不变性吗?我的是酶蛋白,不能让酶失活
3楼2012-08-10 11:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

minimouse

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2012-08-13 07:57:10
不是高手
1、双向电泳对样品浓度有要求吗?我的大概是50mg/l
    对浓度没有要求,你可以参考第一相等点聚焦的上样量进行考虑。第一相等点聚焦的上样量可以去参看GE的固相等点聚焦产品手册,不知道你的是打算跑什么pH范围的,是3-11的还是4-7的?
2、双向电泳对样品中的盐要求高吗?是绝对无盐还是有一定阈值的呀?
    不要求无盐,但是盐离子浓度要低,因为盐离子浓度太高电压上不去,平衡的时间会很长,而且效果也不好
3、可以用超滤进行脱盐吗?超滤后有缓冲液洗脱还是直接用去离子水?如果用缓冲液的话,缓冲液也含盐离子怎么办?
    最好是用水吧,如果出于蛋白稳定性考虑,需要采用缓冲液来稳定pH值的,拿缓冲液盐离子浓度低些也行。比如10mM之类的浓度,影响不大
4、如果用透析,透析液用水还是缓冲液?缓冲液也是含盐的呀?
    这个同3
第一次做,实在不懂,望大家多多帮忙,谢谢!
4楼2012-08-10 16:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jialemon

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by minimouse at 2012-08-10 16:30:35
不是高手
1、双向电泳对样品浓度有要求吗?我的大概是50mg/l
    对浓度没有要求,你可以参考第一相等点聚焦的上样量进行考虑。第一相等点聚焦的上样量可以去参看GE的固相等点聚焦产品手册,不知道你的是打算跑什 ...

我明白了,真的很谢谢,对我非常有帮助
5楼2012-08-11 14:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jialemon 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学279求调剂 +13 哈哈哈^_^ 2026-04-08 13/650 2026-04-08 22:29 by belle15
[考研] 266调剂 +8 daya sun 2026-04-07 9/450 2026-04-08 20:27 by yutian743
[考研] 材料化工总分334求调剂 +7 Riot2025 2026-04-08 7/350 2026-04-08 20:15 by luoyongfeng
[考研] 327求调剂 +9 Xxjc1107. 2026-04-06 10/500 2026-04-08 16:44 by luoyongfeng
[考研] 280求调剂 +9 李rien 2026-04-04 9/450 2026-04-08 13:20 by lijunpoly
[考研] 301求调剂 +10 细胞相关蛋白 2026-04-03 10/500 2026-04-08 10:36 by tjzhao
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 292求调剂 +4 lilllllxccc 2026-04-05 5/250 2026-04-07 09:29 by 纺大杨老师
[考研] 一志愿河北工业大学材料工程,初试344求专硕调剂 +6 15933906766 2026-04-05 6/300 2026-04-06 13:21 by 无际的草原
[考研] 一志愿南航,数一英一学硕317求调剂!! +6 Acaciad 2026-04-04 6/300 2026-04-06 12:13 by 考研学校招点人
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 282求调剂 +7 aaa车辆 2026-04-02 11/550 2026-04-05 17:24 by yulian1987
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-03 4/200 2026-04-04 22:17 by hemengdong
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 材料调剂 +11 吴棂颖! 2026-04-03 11/550 2026-04-04 09:56 by 小小树2024
[考研] 一志愿双非085502,267分,过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
信息提示
请填处理意见