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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手用试剂盒提取植物RNA时的一些小问题
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beescity

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 新手用试剂盒提取植物RNA时的一些小问题

这两天刚开始接触植物RNA提取，用的试剂盒，有些小问题不是很清楚，看看大家都是怎么处理的。
1.液氮研磨样品到什么程度？
我磨到细粉发白，中途加了5-6次液氮，每次5-6ml，很快就挥发了，基本上一直都在磨。
2.如何把样品移到离心管中？
离心管用液氮遇冷过，小勺也遇冷过，但是舀到离心管时，发现小勺进不去，不方便把细粉送进离心管，很多粘在了管口或者离心管接近管口的壁上。
3.如何界定移入的量不超过100mg？
100mg的细粉，大概有多少？我用2ml 离心管，高度大概5mm，不知道量合适不？
4.加入裂解液后涡旋，然后再加入0.5倍体积乙醇，在涡旋，有技术窍门吗？
都涡旋，还是手拿着来回摇摇就可以了。
5.匀浆移入吸附柱后会否堵住柱子？
这个问题与界定样品的量有关系，离心之后把吸附柱上都是材料残渣，会不会有影响？
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1楼 2012-08-01 22:28:51
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beescity

至尊木虫 (著名写手)
OD260/OD230只有1.880，存在异硫氰酸胍或者β-巯基乙醇，是不是应该减少一点点裂解液的量啊？说明后面的wash buffer 不能洗干净。
求高手解答！
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19楼2012-08-03 21:02:34
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
beescity(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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2楼2012-08-01 22:55:46
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
beescity(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 真是热心的虫虫啊 2012-08-02 15:31:54
1.液氮研磨样品到什么程度？
充分研磨，呈均匀粉状即可；
2.如何把样品移到离心管中？
直接加TriZOL，研磨均匀后，再倒入管中；或用1 ml移液枪转移。
3.如何界定移入的量不超过100mg？
取样时，可以用电子天平秤。
4.加入裂解液后涡旋，然后再加入0.5倍体积乙醇，在涡旋，有技术窍门吗？
使用振荡器即可，最短15s。
5.匀浆移入吸附柱后会否堵住柱子？
可以离心后，取上清上柱。
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4楼2012-08-01 23:12:30
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beescity

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zxd95 at 2012-08-01 23:12:30
1.液氮研磨样品到什么程度？
充分研磨，呈均匀粉状即可；
2.如何把样品移到离心管中？
直接加TriZOL，研磨均匀后，再倒入管中；或用1 ml移液枪转移。
3.如何界定移入的量不超过100mg？
取样时，可以用电子天平 ...

对于样品取样时称重，我忘记说了，样品不是在实验室培养的，是在大自然当中生长的，取样时貌似不具备称重条件。
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5楼2012-08-02 00:24:27
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简单回复
jh838111楼
2012-08-02 09:00   回复  
beescity(金币+1): 谢谢参与
假大空13楼
2012-08-02 09:17   回复  
beescity(金币+1): 谢谢参与
祝福。帮
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