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樱花淡淡

铜虫 (初入文坛)

[求助] 怎样从酸奶里提取乳酸菌DNA呀

各位大神,麻烦请教一下,怎么从酸奶样品中提取总细菌的DNA,主要是酸奶的前期处理。

谢谢各位了~
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C’est la vie
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樱花淡淡

铜虫 (初入文坛)

我是帖子毒药吗?都米有人理我
C’est la vie
2楼2012-07-25 22:38:59
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sarahoak

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
樱花淡淡: 金币+10, 有帮助 2012-08-02 20:32:19
提供点实验思路吧,无菌水稀释酸奶,离心去除脂质,然后酚氯仿抽提DNA或者用试剂盒提DNA,第一步的样品稀释倍数自己设几个梯度摸下条件
3楼2012-07-26 00:57:55
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weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以先取一定量的酸奶加入到MRS液体培养基中,然后再提DNA(步骤和一般的菌一样)
4楼2012-07-26 11:04:21
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xyz7819227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用试剂盒提取吧,先离心,然后用试剂盒提取,具体步骤试剂盒的说明书上好像有
海纳百川,有容乃大
5楼2012-07-26 16:36:11
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樱花淡淡

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sarahoak at 2012-07-26 00:57:55
提供点实验思路吧,无菌水稀释酸奶,离心去除脂质,然后酚氯仿抽提DNA或者用试剂盒提DNA,第一步的样品稀释倍数自己设几个梯度摸下条件

终于有人回复我啦~
我们的酸奶样品特别特别的粘稠,里面的蛋白质成分很多。我怕稀释倍数太多了菌会很少。有没有什么好的办法解决这个问题呢~

谢谢啦
C’est la vie
6楼2012-07-26 19:01:03
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樱花淡淡

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by weiyasong at 2012-07-26 11:04:21
可以先取一定量的酸奶加入到MRS液体培养基中,然后再提DNA(步骤和一般的菌一样)

主要是要研究酸奶样品中的乳酸菌多样性,怕接入到MRS里可能菌会有所损失。毕竟很多菌是不能培养的
C’est la vie
7楼2012-07-26 19:03:11
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樱花淡淡

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xyz7819227 at 2012-07-26 16:36:11
用试剂盒提取吧,先离心,然后用试剂盒提取,具体步骤试剂盒的说明书上好像有

我们是用试剂盒提取的,问题是如何处理酸奶样品,怎么把酸奶里的蛋白质和菌体分离,这是个问题~
C’est la vie
8楼2012-07-26 19:04:50
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fxh1229

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
⑴ 以无菌操作吸取样品1mL加入至10mL灭菌生理盐水混合作成1:10的均匀稀释液。
        ⑵ 用1mL灭菌枪头吸取上述稀释液1mL,沿管壁徐徐注入含有10mL灭菌生理盐水的试管内,振摇试管,混合均匀。
        ⑶ 另取1mL灭菌吸管,按上述操作顺序,作10倍递增稀释液,至10-7。(可根据需要采用不同的量,比如500μL加入到5mL灭菌生理盐水中 )
        ⑷ 选择10-5、10-6 、10-7三个适宜稀释度,吸取100μL至无菌培养皿中,再倒入无菌BCP培养基(含有10ppm放线菌酮)混合,每个稀释度作两个平皿。
        ⑹ 待平板表面干燥后,翻转平板,置30℃温箱内培养48h-72h。
       先分离、提纯乳酸菌,再提取DNA
任何东西只要够深都是一把刀
9楼2012-07-26 23:24:44
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独木林001

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

10楼2018-06-04 13:55:32
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