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乳酸菌、酵母菌DNA的提取 已有1人参与
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| 最近要做乳酸菌和酵母菌DNA的提取 我是这方面的小白 希望大虾们能给点详细的提取步骤啊 后面还要PCR鉴定 希望能全面点 谢谢啦 |
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2楼2014-02-21 10:35:46
alimar
金虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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1) 细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基中，37℃摇床（300rpm）培养过液。 2) 细菌收集：取1ml培养物于1.5ml EP管中，室温8000rpm离心5min，弃上清，沉淀重新悬浮于1ml TE（pH8.0）中（用ddH2O也行)。 3) 菌体裂解：加入6μl 50mg/ml的溶菌酶，37℃作用2h。再加2mol/L NaCl 50μl，10% SDS 110μl，20mg/ml的蛋白酶K 3μl，50℃作用3h或37℃过夜。（此时菌液应为透明粘稠液体 4) 抽提：菌液均分到两个1.5ml EP管，加等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，混匀，室温放置5-10min。12000rpm离心10min。抽提两次。（上清很粘稠，吸取时应小心，最好枪头尖应剪去）。 5) 沉淀：加0.6倍体积的异丙醇，混匀，室温放置10min。12000rpm离心10min。 6) 洗涤：沉淀用75%的乙醇洗涤。 7) 抽（凉）干后，溶于50μl ddH2O中，取2-5μl电泳。作PCR模板用。 自己再多看看文献比较一下，最好整理出适合自己样品的方法和步骤，加油。 |
3楼2014-02-28 13:41:43
4楼2014-03-01 13:12:05