| 查看: 12670 | 回复: 11 | ||||
wuyuan1992金虫 (正式写手)
|
[求助]
为什么做PCR时候模板浓度高了会扩增不出目的片段？
|
|||
|
在做真菌ITS序列扩增鉴定种属的时候，师兄让我将总DNA梯度稀释，分别取原液、稀释十倍、稀释一百倍的总DNA作为模板进行PCR扩增。因为凭师兄的经验而谈，有时候可能总DNA浓度太高会导致扩增不出，一次性梯度稀释扩增出目的产物的可能性会很高。 我想问的问题是： 1、为什么总DNA浓度高作为模板会导致扩增不出东西？ 2、PCR时对于模板的浓度有什么规定么？ 希望各位虫友能够帮忙解答，在此谢过～  |
回复此楼» 猜你喜欢
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有21人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有5人回复
-
国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率
已经有8人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有7人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有48人回复
-
filecode
已经有10人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有11人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有8人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有37人回复
-
好奇怪的filecode
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用genomic DNA 为模板做PCR，为什么有的时候能p出来有的时候不能？求指导
已经有10人回复
- PCR条件不可重复
已经有25人回复
- 纠结中：pcr产物做模板进行二次pcr一直失败，问题详细描述，求解。
已经有2人回复
- 重叠PCR出问题，求大神指点
已经有4人回复
- SYBR green 1 real-time PCR 结果分析
已经有4人回复
- pcr产物条带很弱，怎么能改善下
已经有18人回复
- PCR的小女孩~~~
已经有3人回复
- 求助各位用red系统敲除大肠杆菌基因的虫友们~~~
已经有15人回复
- PCR扩启动子序列的问题
已经有0人回复
- 表达表达
已经有6人回复
- PCR扩增不出条带
已经有9人回复
- 急救
已经有6人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 16S PCR扩增的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】用TAKARA的Primer STARHS DNA Polymerase 做PCR
已经有0人回复
- 【分享】【童话】【悲剧】【纪实】~~~《PCR的小女孩》精彩小说
已经有5人回复
- 【求助/交流】菌液PCR的经验
已经有6人回复
cynthia8225
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 210.4
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 98
- 在线: 32.2小时
- 虫号: 1836651
- 注册: 2012-05-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
2楼2012-07-25 14:41:29
starseacow
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +426 - BioEPI: 7
- 应助: 1217 (讲师)
- 金币: 9097.3
- 散金: 16445
- 红花: 226
- 帖子: 4669
- 在线: 2320.2小时
- 虫号: 1136974
- 注册: 2010-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
- 管辖: 动植物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wuyuan1992: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 非常感谢！我感觉很有道理～ 2012-07-26 07:45:19
感谢参与，应助指数 +1
wuyuan1992: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 非常感谢！我感觉很有道理～ 2012-07-26 07:45:19
|
同意楼上提的几条 我考虑还有其他原因，如下 1 模板浓度过高，在退火时模板会和引物竞争，模板与模板互相结合 2 在前几轮PCR反应中，引物只是不断反复和模板结合，和产物结合较少 3 模板浓度过高，最终电泳时会有条带弥散 至于最佳浓度，参考分子克隆实验指南的说法，用哺乳动物基因组DNA做模板时，每个PCR反应所加入DNA约为1 微克，而酵母，细菌与质粒DNA作为模板时，典型模板量应为10 ng，1 ng和1 pg |
3楼2012-07-26 00:06:10
215421160
金虫 (初入文坛)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 642.2
- 帖子: 50
- 在线: 216小时
- 虫号: 1130122
- 注册: 2010-10-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
4楼2012-07-26 02:40:24
wuyuan1992
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 428.3
- 散金: 185
- 红花: 2
- 帖子: 403
- 在线: 277.6小时
- 虫号: 1369725
- 注册: 2011-08-16
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-07-26 07:45:50
wuyuan1992
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 428.3
- 散金: 185
- 红花: 2
- 帖子: 403
- 在线: 277.6小时
- 虫号: 1369725
- 注册: 2011-08-16
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2012-07-26 07:46:53
匿名
用户注销 (正式写手)
- 应助: 128 (高中生)
- 金币: 4550.4
- 散金: 50
- 红花: 22
- 帖子: 934
- 在线: 645.1小时
- 虫号: 0
- 注册: 2011-10-17
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
7楼2012-07-26 08:12:01
geek23
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 3
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 3680.8
- 红花: 6
- 帖子: 277
- 在线: 212.4小时
- 虫号: 1042788
- 注册: 2010-06-17
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
8楼2012-07-26 08:17:10
小灰灰128
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1210.2
- 红花: 1
- 帖子: 301
- 在线: 103.3小时
- 虫号: 1512428
- 注册: 2011-11-27
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤病因
9楼2012-07-26 08:23:24
10楼2013-03-01 16:52:10
