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ghost202

铜虫 (正式写手)

[求助] 急救

请求做过real-time pcr的大侠:

      现在我正在做real-time pcr,可是每次结果都很郁闷,我们用的板都是横条有8个孔,每次我加完样,盖上塑料片后,稍微离心,让溶液全部离到底部。可是出过结果的时候,板的前面两个,和最后两个(我每次都是重复两次试验,即前面两个和后面两个均为同一个样做的重复)同样地样跑出来的结果相差很大。但是其他孔同样地样做的重复结果很接近。我不知道为什么?

    我实验室就我一个人有这个问题出现,有一个师兄推荐先加模板,模板加到管底,再加PCR水和SRBY染料,不需要离心。可是结果还是前两个和最后两个重复性不好,其他的没问题。


请求高人啊,谢谢谢谢!!!!
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ghost202

铜虫 (正式写手)

西瓜: 点击你的帖子下方那排按钮里面的“编辑”。就在“通知版主处理”的左边。 2011-09-04 19:02:22
怎么编辑啊???
最主要就是问怎么可以让real-time pcr 重复性好一些》?谢谢
2楼2011-09-03 18:31:48
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ghost202(金币+5): 有点意思 2011-09-03 22:13:57
你的实验设计有问题:应该每个样做三个重复试验。
3楼2011-09-03 18:47:06
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ghost202

铜虫 (正式写手)

dhd997: 你可以引用回复,这样可以给他一个提示,方便他及时看到,单纯跟帖,他可能不知道你继续提问了啊 2011-09-04 09:48:16
三个重复和两个重复有什么不一样呢?
假如三个重复里面有两个不一样,可能是什么问题呢?
谢谢
4楼2011-09-03 20:57:28
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
ghost202(金币+5): 谢谢哦 2011-09-04 09:22:08
dhd997(金币+3): good 2011-09-04 09:48:32
ghost202(金币+2): 2011-12-01 09:14:05
三个重复就是每个样品做三个管,再者一定要离心,有那种离心排管的小型离心机,注意观察直到PCR混合液中没有气泡才行。通常我们是最后加模板,加完后看一下,枪头绝对不能有可见的残留。注意了这些问题后应该就可以了。
5楼2011-09-04 08:35:39
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ghost202

铜虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 鼓励反馈哦。下次小心哈~ 2011-09-04 19:02:54
亲爱的战友们,问题发现了。。。。。
我为了记好每个样品加在那里,在第一个和最后一个盖子上都做了标记,所以可能荧光就照不到,所以我第一个和最后一个的值就偏小了。

谢谢大家,希望大家接受我的教训!
6楼2011-09-04 15:41:42
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ghost202

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ghost202 at 2011-09-03 20:57:28:
三个重复和两个重复有什么不一样呢?
假如三个重复里面有两个不一样,可能是什么问题呢?
谢谢

问题发现了,谢谢你哦
7楼2011-09-04 15:43:34
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