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ghost202

铜虫 (正式写手)

[求助] 急救

请求做过real-time pcr的大侠：

      现在我正在做real-time pcr，可是每次结果都很郁闷，我们用的板都是横条有8个孔，每次我加完样，盖上塑料片后，稍微离心，让溶液全部离到底部。可是出过结果的时候，板的前面两个，和最后两个（我每次都是重复两次试验，即前面两个和后面两个均为同一个样做的重复）同样地样跑出来的结果相差很大。但是其他孔同样地样做的重复结果很接近。我不知道为什么？

    我实验室就我一个人有这个问题出现，有一个师兄推荐先加模板，模板加到管底，再加PCR水和SRBY染料，不需要离心。可是结果还是前两个和最后两个重复性不好，其他的没问题。


请求高人啊，谢谢谢谢！！！！
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1楼 2011-09-02 23:17:59
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ghost202

铜虫 (正式写手)
dhd997: 你可以引用回复，这样可以给他一个提示，方便他及时看到，单纯跟帖，他可能不知道你继续提问了啊 2011-09-04 09:48:16
三个重复和两个重复有什么不一样呢？
假如三个重复里面有两个不一样，可能是什么问题呢？
谢谢
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4楼2011-09-03 20:57:28
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ghost202

铜虫 (正式写手)
西瓜: 点击你的帖子下方那排按钮里面的“编辑”。就在“通知版主处理”的左边。 2011-09-04 19:02:22
怎么编辑啊？？？
最主要就是问怎么可以让real-time pcr 重复性好一些》？谢谢
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2楼2011-09-03 18:31:48
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ghost202(金币+5): 有点意思 2011-09-03 22:13:57
你的实验设计有问题：应该每个样做三个重复试验。
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3楼2011-09-03 18:47:06
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
ghost202(金币+5): 谢谢哦 2011-09-04 09:22:08
dhd997(金币+3): good 2011-09-04 09:48:32
ghost202(金币+2): 2011-12-01 09:14:05
三个重复就是每个样品做三个管，再者一定要离心，有那种离心排管的小型离心机，注意观察直到PCR混合液中没有气泡才行。通常我们是最后加模板，加完后看一下，枪头绝对不能有可见的残留。注意了这些问题后应该就可以了。
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5楼2011-09-04 08:35:39
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