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fancylemon铁杆木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】用TAKARA的Primer STARHS DNA Polymerase 做PCR
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各位虫友们好！我想问一下大家有关PCR的问题。 我用TAKARA的Primer STARHS DNA Polymerase ，以RT-PCR产物为模板做PCR，我设计了两套引物，一个是内部引物，一个是外部引物，内引物和外引物之间有交叉点。也就是说用内引物扩增出来不是全长，我的基因是1700bp的，用内引也就1500bp吧。 我用Primer STARHS DNA Polymerase 酶，只用内引物扩增的时候，跑电泳有很多弥散，看不到什么条带；只用外引物扩增跑电泳也有很多弥散，但是在2000bp左右和900bp左右有两条很暗的条带，和我的目的1700bp的条带不相符，这是怎么回事呢？如果用内引物的PCR产物做模板，再用外引物扩增，也全是弥散。我的pcr程序是98° 10s;60° 5s;72° 1min40s;72° 6min 。那个酶的说明书上说是有2步法和3步法，我用的3步法，98° 10s;60° 5s;72° 1min40s，最后我又加上了总延伸，这样做对么？我的跑胶结果显示扩不出来我的目的基因，而且全是弥散？请各位虫友指教！ |
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