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wuyuan1992

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么做PCR时候模板浓度高了会扩增不出目的片段?

在做真菌ITS序列扩增鉴定种属的时候,师兄让我将总DNA梯度稀释,分别取原液、稀释十倍、稀释一百倍的总DNA作为模板进行PCR扩增。因为凭师兄的经验而谈,有时候可能总DNA浓度太高会导致扩增不出,一次性梯度稀释扩增出目的产物的可能性会很高。
     我想问的问题是:
     1、为什么总DNA浓度高作为模板会导致扩增不出东西?
     2、PCR时对于模板的浓度有什么规定么?
   希望各位虫友能够帮忙解答,在此谢过~
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非淡泊无以明志,非宁静无以致远。
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wuyuan1992

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cynthia8225 at 2012-07-25 14:41:29
这个问题我是这么理解的DNA浓度太高了会导致非特异性扩增的上升,然后就是当你的DNA浓度高的时候,由于你的是总DNA,所以蛋白含量也会上升影响PCR反应体系,再就是DNA是具有高级结构的,浓度过高对你的引物结合并不 ...

非常感谢~
非淡泊无以明志,非宁静无以致远。
5楼2012-07-26 07:45:50
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wuyuan1992

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 215421160 at 2012-07-26 02:40:24
另外就是,看你的DNA是从什么地方提取的了,从某些样品例如粪便中提取,会有很多Inhibitor,因而稀释一下就会扩出来。楼上几位讲得很好,我只是补充一下。

嘿嘿,我的DNA是提取的真菌的总DNA,是液体纯培养发酵的菌丝~非常感谢你的补充~
非淡泊无以明志,非宁静无以致远。
6楼2012-07-26 07:46:53
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