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zibeisha

木虫 (著名写手)

[求助] RACE的引物设计问题

鄙人要扩增一个基因全长,目前已将中间片段扩增出来了,结果如下:ATGAGTCTTAGAGGACTGGGTGTAGATCCACGCTGTCGCTGCATTGAAACTGAGAGTCGACGCATTGGAAAACACATAGAGAGTGTGGAGCTCTTCCCTCCAAACTCACACTGTAAAGACACAGAGATCATTGCAACCCTGAAGATAACTGGGAAAGAGATCTGTCTGGACCCTACTGCACCCTGGGTTAAGAAAGTCAT 。请问各位大侠,如何根据这个中间片段设计3‘RACE和5’RACE引物,进行3‘RACE和5’RACE扩增?
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有时我们无奈,有时我们迷茫,可是不管怎样,只要我们积极生活,命运就不会亏待我们。
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凤凰-涅磐

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
高中学的真是小菜一碟,同情你。为你加油,相信你自己,可以做出来
吃得苦中苦,方为人上人
5楼2012-07-22 20:01:23
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free_zi

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解决问题! 2012-07-21 22:13:40
首先, 应确定该中间片段在全长中的大概位置,距离5‘端和3’端大概还有多长?
其次,你是否建有全长的race文库?
最后,如果中间片段距离5‘和3’大小合适的话,直接依据中间序列设计完全匹配引物,以RACE文库为模板扩增即可
2楼2012-07-21 18:12:05
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xmchen1015

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
只要保证3`RACE,5`RACE扩增完后,两都之间有重叠区就可以,再就是注意设计的引物Tm值。
3楼2012-07-21 20:09:47
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yananhl

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by free_zi at 2012-07-21 18:12:05
首先, 应确定该中间片段在全长中的大概位置,距离5‘端和3’端大概还有多长?
其次,你是否建有全长的race文库?
最后,如果中间片段距离5‘和3’大小合适的话,直接依据中间序列设计完全匹配引物,以RACE文库为 ...

如果扩出来的是单条带,但不是自己所要的基因是怎么回事呢?引物的问题吗?应该怎么设计呢?
4楼2012-07-22 19:44:57
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