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fanbobecky

新虫 (初入文坛)

[求助] 5‘race

最近在做race,用的是invitrogen的L1502-01,现在在p5’end,试了很多次都没有出来,有一次巢式pcr的结果出现很多条带,后来重新优化了PCR条件,但是没有出现条带,只有smear。很是郁闷,不知道是哪里出了问题。。。我想问,试剂盒里提供的5‘Nested primer的退火温度(78度)与我自己设计的巢式PCR的引物的退火温度(68度)相差比较大会不会对pcr结果有很大影响?
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