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zibeisha

木虫 (著名写手)

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[求助] RACE的引物设计问题

鄙人要扩增一个基因全长，目前已将中间片段扩增出来了，结果如下：ATGAGTCTTAGAGGACTGGGTGTAGATCCACGCTGTCGCTGCATTGAAACTGAGAGTCGACGCATTGGAAAACACATAGAGAGTGTGGAGCTCTTCCCTCCAAACTCACACTGTAAAGACACAGAGATCATTGCAACCCTGAAGATAACTGGGAAAGAGATCTGTCTGGACCCTACTGCACCCTGGGTTAAGAAAGTCAT 。请问各位大侠，如何根据这个中间片段设计3‘RACE和5’RACE引物，进行3‘RACE和5’RACE扩增？

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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。

1楼 2012-07-21 11:48:00

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yananhl

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by free_zi at 2012-07-21 18:12:05
首先，应确定该中间片段在全长中的大概位置，距离5‘端和3’端大概还有多长？
其次，你是否建有全长的race文库？
最后，如果中间片段距离5‘和3’大小合适的话，直接依据中间序列设计完全匹配引物，以RACE文库为 ...

如果扩出来的是单条带，但不是自己所要的基因是怎么回事呢？引物的问题吗？应该怎么设计呢？