| 查看: 2028 | 回复: 7 | |||
[求助]
RACE的引物设计问题
|
| 鄙人要扩增一个基因全长，目前已将中间片段扩增出来了，结果如下：ATGAGTCTTAGAGGACTGGGTGTAGATCCACGCTGTCGCTGCATTGAAACTGAGAGTCGACGCATTGGAAAACACATAGAGAGTGTGGAGCTCTTCCCTCCAAACTCACACTGTAAAGACACAGAGATCATTGCAACCCTGAAGATAACTGGGAAAGAGATCTGTCTGGACCCTACTGCACCCTGGGTTAAGAAAGTCAT 。请问各位大侠，如何根据这个中间片段设计3‘RACE和5’RACE引物，进行3‘RACE和5’RACE扩增？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有280人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 救急，3RACE老是没有目前条带
已经有3人回复
- 植物功能基因实验设计
已经有2人回复
- 关于基因全长克隆的问题，求前辈指导！！
已经有1人回复
- 5‘race
已经有0人回复
- RACE拼接后扩增全长的测序结果不一样
已经有5人回复
- 一个新基因的全长克隆
已经有1人回复
- RACE特异性引物设计
已经有3人回复
- 得到完整cDNA后，怎么找完整的DNA和确定ORF
已经有5人回复
- 【求助/交流】做5'序列必须用RACE吗？
已经有5人回复
- 【求助/交流】新手请教如何对不同物种中某一酶的氨基酸序列进行比对再设计简并引物啊�
已经有10人回复
free_zi
金虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 10004.9
- 帖子: 1836
- 在线: 262.2小时
- 虫号: 444409
- 注册: 2007-10-27
- 性别: GG
- 专业: 植物学
2楼2012-07-21 18:12:05
3楼2012-07-21 20:09:47
yananhl
银虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 499.1
- 散金: 167
- 帖子: 251
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1892568
- 注册: 2012-07-14
- 专业: 分子与进化生态学
4楼2012-07-22 19:44:57
5楼2012-07-22 20:01:23
wanghd2826
铁虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 33
- 散金: 130
- 帖子: 128
- 在线: 36.9小时
- 虫号: 1316229
- 注册: 2011-06-06
- 性别: GG
- 专业: 森林生物学
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极分享经验 2012-07-23 15:46:36
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极分享经验 2012-07-23 15:46:36
|
正好最近也在做，和lz分享一下经验吧。 1、长度大概23-28nt。不用太长，没啥用。 2、高tm，尽量tm值高于65度，能上70也行，便于后边使用降落PCR。 3、gc含量尽量接近50或更高。 4、推荐使用pp5和oligo6，前者搜索，后者检测，虽然tm值相差会很大（pp5计算方法不如oligo精细），但无伤大雅。 5、也可手动设计，就是单用oligo，寻找tm较高的区域，手动调整。 6、如果片段较短，建议先进行3’，相对简单。之后得到3‘片段了，再在拼接起来的长片段上设计5’GSP。原因是5‘一般用试剂盒，对引物要求较高，尤其是用TAKARA的，如果引物设计不好，就是烧钱，片段长点，引物设计的选择余地就大。 望对lz有用！ |
6楼2012-07-23 09:40:05
free_zi
金虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 10004.9
- 帖子: 1836
- 在线: 262.2小时
- 虫号: 444409
- 注册: 2007-10-27
- 性别: GG
- 专业: 植物学
7楼2012-07-25 11:27:58
yananhl
银虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 499.1
- 散金: 167
- 帖子: 251
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1892568
- 注册: 2012-07-14
- 专业: 分子与进化生态学
8楼2012-07-25 11:33:07
120