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栀子花1120

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳条带很淡,能用于割胶回收吗

我的电泳图条带很暗,我想做割胶回收,不知道条带淡了,做回收有没有意义?

还有请高人分析一下为什么我的电泳条带会这么淡啊  ,我的DNA用的是试剂盒提的,浓度比较低,只有20~30ng/ul.但是配50ul的体系时,我加了4ul。应该怎样改善,才能得到比较好的条带呢,O(∩_∩)O谢谢了
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zqx128

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
条带很淡,可能是PCR的条件没优化好吧。二楼的说的挺好的。还有一个办法就是二次PCR,把第一次的产物稀释10倍当模板来扩增,也会得到比较亮的条带。祝好!
3楼2012-07-13 14:27:11
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查看全部 8 个回答

dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
栀子花1120: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-13 15:38:02
1、改善DNA提取方法:如加大样品量、研磨充分等。
2、改变PCR条件,提高扩增效率。
3、实在懒得做前两项的话,多扩几管,回收时胶变厚、加样孔变大,把所有PCR产物全部上样,切胶回收。
我喜欢默默地被你注视默默地注视着你,我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
2楼2012-07-13 14:08:12
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84146922

金虫 (小有名气)

1.条带很淡,回收还是可以的,本人曾经试过带很淡,回收之后用NANO测浓度为负值,连接转化,转化子依然很多,阳性也很多。

2.提取DNA用的试剂盒,最好让DNA与柱子充分接触,最后洗脱时候,洗脱液最好放于50-60℃预热。

3.增大提取的量。

4.做个梯度PCR,先改善退火温度,然后调节模板的量,多PCR几管。

不过还是本人试验总结,连接转化,里面有质粒,其他条件正确,就可以转出阳性转化子。
4楼2012-07-16 08:26:20
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xudabin98

木虫 (正式写手)

你别割胶回收,不然可能连东西都得不到,建议液体回收.
5楼2012-07-16 12:46:16
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