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distant616金虫 (小有名气)
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[求助]
Q_PCR结果，请高手指点一下
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首先，我想问一下，Q_PCR的结果是不是可以正常的跑电泳，应该能够出现目的条带；第二，我的溶解曲线是单峰，扩增曲线也还可以，但是为什么跑电泳，竟然什么也没用呢。第三，NTC也有出现单峰，怀疑是不是被污染了，还有就是标准曲线做的还可以，所以判断并不确定。 一下是扩增曲线和溶解曲线以及跑电泳的结果，请大家帮忙分析一下，谢谢。我这小硕在此感激不尽。 |
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2012-07-12 11:35:25, 121.5 K
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溶解曲线很好啊，都没有杂峰。 那电泳你试过几次了，都是同样结果么？ 普通PCR，同样电泳条件都有很清楚的条带么？ |
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3楼2012-07-12 15:21:03
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【答案】应助回帖
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阳性对照P出来，而样品P不出来，可能原因是：1. 样品中目标基因浓度太低，超出检测范围；2. 引物针对的基因可能在你的样品中不存在。 可以考虑： 1. 继续优化，如增加镁离子、BSA牛血清蛋白，产物扩增时间是否够？ 2.换引物。每对引物都有自己的扩增范围，不是万能的。 |
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那就是把样品模板浓度增加。我以前试过把PCR产物放在高温环境（50-60度）下一段时间（根据样品体积来掌握）后在再回收。需要注意不要烘干了。 |
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