24小时热门版块排行榜    

查看: 2389  |  回复: 13

distant616

金虫 (小有名气)

[求助] Q_PCR结果,请高手指点一下

首先,我想问一下,Q_PCR的结果是不是可以正常的跑电泳,应该能够出现目的条带;第二,我的溶解曲线是单峰,扩增曲线也还可以,但是为什么跑电泳,竟然什么也没用呢。第三,NTC也有出现单峰,怀疑是不是被污染了,还有就是标准曲线做的还可以,所以判断并不确定。
一下是扩增曲线和溶解曲线以及跑电泳的结果,请大家帮忙分析一下,谢谢。我这小硕在此感激不尽。
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : q-PCRresult.doc
  • 2012-07-12 11:35:25, 121.5 K

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yanqindeng

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
distant616: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-15 09:29:58
电泳出来这样子的结果是正常的。
我看到标准曲线低浓度的Ct值可能有些偏差,说明引物的扩增效率可能有点低。模板浓度较高时的结果可信(图中前三个点),但模板浓度较低的时候可能有点问题。
即使引物扩增效率较高,引物特异性较好,跑琼脂糖电泳还是可能会出现这样子的结果,具体原因我以前好像在网上看见过,但是想不起来了。
如果你需要产物,最好还是采用普通PCR。
4楼2012-07-13 17:28:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

bondy22

铁杆木虫 (著名写手)

看不懂,请高手解答一下吧
奔与夲
2楼2012-07-12 14:04:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vivanslum

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
ymnh: 金币+1, 积极参与交流,欢迎常来环境版 2012-07-12 19:37:16
溶解曲线很好啊,都没有杂峰。
那电泳你试过几次了,都是同样结果么?
普通PCR,同样电泳条件都有很清楚的条带么?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

心若调适,道可得矣;清净安乐,道不失矣
3楼2012-07-12 15:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

distant616

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by vivanslum at 2012-07-12 15:21:03
溶解曲线很好啊,都没有杂峰。
那电泳你试过几次了,都是同样结果么?
普通PCR,同样电泳条件都有很清楚的条带么?

普通电泳都是P不出来的,电泳我跑过三次,都是相同的结果。
5楼2012-07-15 09:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

distant616

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yanqindeng at 2012-07-13 17:28:13
电泳出来这样子的结果是正常的。
我看到标准曲线低浓度的Ct值可能有些偏差,说明引物的扩增效率可能有点低。模板浓度较高时的结果可信(图中前三个点),但模板浓度较低的时候可能有点问题。
即使引物扩增效率较高 ...

我样品的顺序是,第一个是NTC,接下来四个是Sample,剩下的三个是质粒。我用普通PCR都P不出来,不知道能否给写什么意见,我的引物条件已经优化了,标准的质粒是能够P出来的,但是样品还是P不出来。
6楼2012-07-15 09:32:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

distant616

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yanqindeng at 2012-07-13 17:28:13
电泳出来这样子的结果是正常的。
我看到标准曲线低浓度的Ct值可能有些偏差,说明引物的扩增效率可能有点低。模板浓度较高时的结果可信(图中前三个点),但模板浓度较低的时候可能有点问题。
即使引物扩增效率较高 ...

普通的PCR我P不出来啊,条件已经优化了,用标准质粒做参考,标准质粒是有目的条带的,而我的样品依旧没有。请问,能够给些什么好的意见吗?
7楼2012-07-15 09:33:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanqindeng

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


bestlike: 金币+1, 鼓励新虫交流! 2012-07-16 11:28:44
阳性对照P出来,而样品P不出来,可能原因是:1. 样品中目标基因浓度太低,超出检测范围;2. 引物针对的基因可能在你的样品中不存在。
可以考虑:
1. 继续优化,如增加镁离子、BSA牛血清蛋白,产物扩增时间是否够?
2.换引物。每对引物都有自己的扩增范围,不是万能的。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2012-07-16 10:57:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

distant616

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by yanqindeng at 2012-07-16 10:57:37
阳性对照P出来,而样品P不出来,可能原因是:1. 样品中目标基因浓度太低,超出检测范围;2. 引物针对的基因可能在你的样品中不存在。
可以考虑:
1. 继续优化,如增加镁离子、BSA牛血清蛋白,产物扩增时间是否够? ...

扩增时间肯定在,我觉得是基因浓度太低了,我想知道能够怎么样提高基因浓度呢?
9楼2012-07-16 18:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanqindeng

金虫 (正式写手)


bestlike: 金币+1, 鼓励新虫! 2012-07-17 15:08:07
引用回帖:
9楼: Originally posted by distant616 at 2012-07-16 18:24:35
扩增时间肯定在,我觉得是基因浓度太低了,我想知道能够怎么样提高基因浓度呢?...

那就是把样品模板浓度增加。我以前试过把PCR产物放在高温环境(50-60度)下一段时间(根据样品体积来掌握)后在再回收。需要注意不要烘干了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

10楼2012-07-17 14:58:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 distant616 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 5/250 2026-03-17 06:56 by Muziwl
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
请填处理意见