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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切过DNA片段放了一周还能连接吗
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ygyly

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切过DNA片段放了一周还能连接吗

我用HindIII 和NcoI 双酶切的DNA片段和Duet载体，由于一开始感受态没做好，就在-18℃放置了一周，现在还能连接吗？
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1楼 2012-07-11 17:52:32
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-11 21:33:18
-20℃保藏的话应该没问题的，可以进行连接的~
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聪明才智要为意外做准备~~
2楼2012-07-11 19:59:02
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chunlong0377

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-11 21:33:21
能连接，可以把酶切产物量加大，相对浓度提高，做连接时候。
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NCS
3楼2012-07-11 20:11:13
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ygyly

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chunlong0377 at 2012-07-11 20:11:13
能连接，可以把酶切产物量加大，相对浓度提高，做连接时候。

谢谢！浓度提高是指扩大目的基因和载体的比值吗还是比值不变，同时提高两者在体系中的浓度？
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4楼2012-07-12 09:08:46
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ygyly

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by necilyx at 2012-07-11 19:59:02
-20℃保藏的话应该没问题的，可以进行连接的~

谢谢！向已经酶切过的片段，最多能放置多长时间？
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5楼2012-07-12 09:09:59
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chunlong0377

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ygyly at 2012-07-12 09:08:46
谢谢！浓度提高是指扩大目的基因和载体的比值吗还是比值不变，同时提高两者在体系中的浓度？...

扩大目的基因和载体的比值。
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ygyly
NCS
6楼2012-07-12 09:16:47
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ygyly

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by chunlong0377 at 2012-07-12 09:16:47
扩大目的基因和载体的比值。...

谢谢！
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7楼2012-07-12 10:06:32
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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肯定可以用，我之前酶切的片段因为出差做中试，所以在4度放了将近20天，回来照样ok。你的还放在-18，那应该是没有问题的。
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ygyly
8楼2012-07-12 10:15:49
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ygyly

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 陈年芬芳 at 2012-07-12 10:15:49
肯定可以用，我之前酶切的片段因为出差做中试，所以在4度放了将近20天，回来照样ok。你的还放在-18，那应该是没有问题的。

谢谢！我明天试试！
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9楼2012-07-12 12:14:44
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ranger04

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用TE buffer溶解的酶切产物可以在-20C存放6个月没问题。我曾经用过几个半年前切好的载体，一切正常。仅供参考
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ygyly
10楼2012-07-12 13:36:38
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