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陈年芬芳

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很认真的解答,分析的很全面 2012-07-13 16:02:46
这可能有2种情况。
一种是你看到的“单菌落”有2个甚至多个菌,这样如果你PCR有阳性结果的话(要有阴性对照)再划线分离应该是可以分出来的。
第二种就是菌里含有多个载体,虽说有载体之间不相容之说,但这也是存在的情况,我转酵母的时候也碰到过类似的问题。
个人认为:
在转化后得到克隆了,应该从以下几个方面来验证:
1.PCR,不仅要有目标片段的PCR验证,还要将载体上得引物与片段上得引物互相配合来进行菌落PCR验证,同时要有阴性对照。
2.PCR出来阳性结果后只能说明你的菌里有你需要的,这个时候需要接菌提质粒,再进行酶切鉴定,如果与载体和目标片段的大小相符,那应该就可以送测序了。有其它条带就要好好分析了。
所以个人意见在PCR得到阳性结果后不要直接往下做或测序。因为PCR结果并不是100%确定。要不做到后面出问题了分析都不知从何来起。
7楼2012-07-13 09:17:22
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