应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR中遇到的问题
51/1返回列表
查看: 1639  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

20111987

金虫 (正式写手)

[求助] PCR中遇到的问题

请大家帮忙分析一下：我提取RNA反转录后，直接作为模板，用4种不同引物扩增得到的电泳图如下：，，由于各个条带亮度无差别，又将模板稀释10倍，按照同样的程序扩增，得到结果如下：。模板稀释后几乎还是很难看出差别，下一步该如何解决，我第一步稀释模板的想法行不行得通，请各位帮忙分析一下，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-10 15:41:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20111987

金虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by dingxiuying at 2012-07-13 08:55:56
这么说你要做的是半定量。
我觉得你要半定量的话，就要保证最初用于反转录的总RNA量需要一样，反转录后再PCRr时各组分的量要一致。如果前面控制的很好，扩增出的条带亮度几乎一致的话，说明这几个目的基因的表达量 ...

嗯，对，我就是这个目的，因为我们实验条件有限，不能准确知道最初的RNA浓度，所以我就想用内参引物来扩增反转录后的cDNA，用内参基因的亮度来调节使模板浓度一致，再看其它基因的表达量，不知道这样可行不？
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-14 11:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不清楚你最终想解决什么问题。
赞一下 回复此楼
我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
2楼2012-07-11 14:14:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-12 16:56:26
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极应助 2012-07-13 16:07:02
如果引物是同一的，那么扩出来的产物应该是大小片段一样的。如果引物不是相同的，而产物片段大小恰巧一样大，也应该在同一直线上。而，你这里的电泳图，呈有规律的波动形状，应该是你电泳时，有些胶没有被缓冲液淹没住，或者是胶不均匀，导致上面的缓冲液层不均匀，受电不均匀。建议你使用多一些电泳缓冲液试试。(个人见解，不正之处还请原谅)
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-11 15:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingxiuying at 2012-07-11 14:14:25
不清楚你最终想解决什么问题。

我这是用不同引物扩增出的条带，想从电泳图中看到每种目的基因表达量的差别，不知道应该如何解决？
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-12 16:54:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 18:10 by 7huP8NPKZCp9
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 9/450 2026-08-15 17:46 by 7huP8NPKZCp9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 17:42 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 P4JhWrbJGjSe 2026-08-14 5/250 2026-08-15 15:46 by QXtWNz7PI7wZ
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 3/150 2026-08-15 14:53 by QXtWNz7PI7wZ
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭