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758836596

铜虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 169.7
帖子: 47
在线: 25.7小时
虫号: 1864623
注册: 2012-06-19
性别: MM
专业: 细胞信号转导

[求助] pMAL载体表达重组蛋白

最近在做蛋白表达，载体选择的是pMAL，目的片段是自己设计的一段300多bp的片段，质粒构建成功之后蛋白就是表达不出来，宿主菌试了TB1和BL21，诱导温度试了37,30,16，IPTG也试了各种浓度，结果还是诱导不出来，请问有什么别的办法啊？谢谢各位了。

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1楼2012-07-02 21:14:35

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sophia_zhao

银虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 384.2
红花: 1
帖子: 10
在线: 8.2小时
虫号: 1123013
注册: 2010-10-15
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
758836596: 金币+1, ★有帮助 2012-07-05 10:53:44
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-05 13:44:56

有些蛋白即使是用MBP这样高表达高可溶的标签也还是不行，尝试Rosetta是一方面，另外楼主可以分析一下蛋白的可溶性，如果疏水性氨基酸太多且聚集在C末端的话，可以删掉几个，或者加几个亲水性氨基酸，楼主可以看看这方面的文献。如果楼主做的是膜蛋白的话，确实会有一些奇怪的现象，尝试其它的载体也是必不可少的~

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13楼2012-07-05 10:44:24

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