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758836596

铜虫 (初入文坛)

[求助] pMAL载体表达重组蛋白

最近在做蛋白表达,载体选择的是pMAL,目的片段是自己设计的一段300多bp的片段,质粒构建成功之后蛋白就是表达不出来,宿主菌试了TB1和BL21,诱导温度试了37,30,16,IPTG也试了各种浓度,结果还是诱导不出来,请问有什么别的办法啊?谢谢各位了。
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sophia_zhao

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
758836596: 金币+1, ★有帮助 2012-07-05 10:53:44
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-05 13:44:56
有些蛋白即使是用MBP这样高表达高可溶的标签也还是不行,尝试Rosetta是一方面,另外楼主可以分析一下蛋白的可溶性,如果疏水性氨基酸太多且聚集在C末端的话,可以删掉几个,或者加几个亲水性氨基酸,楼主可以看看这方面的文献。如果楼主做的是膜蛋白的话,确实会有一些奇怪的现象,尝试其它的载体也是必不可少的~
13楼2012-07-05 10:44:24
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查看全部 15 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 虫虫最近很活跃哦,谢谢对分子版的支持 2012-07-03 15:36:20
gyesang: 回帖置顶 2013-05-29 19:02:17
表达不出来的原因很多的,宿主菌跟诱导条件是一方面,另一方面要考虑你扩增的目的片段是否完整?有无表达先例,这个可以参照一些文献,还有你目标片段的稀有密码子是否检测过,如果连续出现稀有密码子,可能会造成翻译中断,这也会造成蛋白表达的失败,如果是这个情况就需要更换专门表达稀有密码子过多的宿主细胞.
建议楼主多从表达载体和目的片段的结构入手,祝楼主好运.
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-02 21:48:45
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bayo

禁虫 (初入文坛)

小丹木木: 屏蔽内容, 广告屏蔽 2012-07-03 15:36:51
本帖内容被屏蔽

4楼2012-07-03 11:49:58
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758836596

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-07-03 10:46:02
顶

5楼2012-07-03 13:29:33
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