24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

WSW_Alone

木虫 (著名写手)

应助: 25 (小学生)
金币: 7088.4
红花: 6
帖子: 1254
在线: 281小时
虫号: 821578
注册: 2009-08-04
性别: GG
专业: 微生物生态学

[求助] 试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。

如题，土壤筛选的菌，用试剂盒提取DNA后，跑胶检测（如图）有条带，进行16S rDNA PCR扩增，结果却没有。请教一下哪里出了问题？（注：上一批也是这么做的，大部分都跑出来了，不知道为何这次都没出来，条件什么的都一样）
体系是通用的，我用的引物是27f/1492r
扩增条件：94℃ 5min
            94℃ 45s
            56℃ 45s
            72℃ 90s
               32个循环
      72℃ 20min
求大神指导，不胜感激。

试剂盒提取DNA后直接跑胶检测结果

PCR产物跑胶结果

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

土壤微生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

土壤细菌DNA PCR问题已经有6人回复
胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。已经有16人回复
崩溃ing---PCR后无条带问题已经有16人回复
土壤总细菌16S PCR-条带不亮的问题已经有19人回复
基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱求助已经有3人回复
PCR产物回收之后跑胶浓度过低已经有17人回复
土壤中含有农药，提取的土壤DNA进行PCR扩增，农药会抑制PCR反应吗已经有5人回复
看看我的DNA提取及PCR结果有什么问题已经有11人回复
【求助/交流】细菌基因组DNA提取试剂盒已经有10人回复
【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带已经有7人回复
【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事? 已经有5人回复
【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事？？急！！！已经有36人回复
【求助/交流】DNA跑胶2ul有目的带很清晰，但是胶回收时，上样量为20ul时跑电泳却降解� 已经有17人回复

處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。

1楼 2012-06-27 16:52:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sk_yb

新虫 (小有名气)

应助: 54 (初中生)
金币: 17
帖子: 115
在线: 29.8小时
虫号: 1844109
注册: 2012-06-02
专业: 脑血管结构、功能异常及相

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WSW_Alone: 金币+4, ★★★很有帮助, 言之有理，考虑加一个之前扩增出来了的菌进行对照。 2012-06-28 11:04:23
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-28 15:43:41
WSW_Alone: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 设置阳性对照发现应该是试剂出了点问题，还是我自己做实验不够严谨，多谢多谢。 2012-07-03 20:12:51

这个可能因素非常多。建议设一个正对照，提取单一菌株基因组，用来检测你的pcr体系。要是能出说明是你提取基因组的问题。基因组中可能有抑制pcr的成分。