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WSW_Alone木虫 (著名写手)
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[求助]
试剂盒提取细菌DNA后，跑胶检测有条带，但是PCR后却无扩增产物。
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如题，土壤筛选的菌，用试剂盒提取DNA后，跑胶检测（如图）有条带，进行16S rDNA PCR扩增，结果却没有。请教一下哪里出了问题？（注：上一批也是这么做的，大部分都跑出来了，不知道为何这次都没出来，条件什么的都一样） 体系是通用的，我用的引物是27f/1492r 扩增条件：94℃ 5min 94℃ 45s 56℃ 45s 72℃ 90s 32个循环 72℃ 20min 求大神指导，不胜感激。  试剂盒提取DNA后直接跑胶检测结果  PCR产物跑胶结果 |
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 土壤微生物 |
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WSW_Alone
木虫 (著名写手)
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- 虫号: 821578
- 注册: 2009-08-04
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
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设置阳性对照和空白对照（排除试剂失效或污染的情况） 如果扩增不出来再对退火温度进行梯度实验，确定一个合适的温度（可以扩增，且非特异性扩增少） 还不行的话考虑加些增强剂或直接用premix（我后面基本上用预混液了。 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2017-01-16 08:39:48