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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 蛋白质二级结构红外测定
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杭州小月

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质二级结构红外测定

求助，哪位虫友用红外光谱仪测过蛋白质的二级结构，是不是必须要求样品是纯品？我想要测定牛奶中蛋白质的二级结构，可不可以用牛奶直接测定？或者需要先把牛奶蛋白纯化？请高手指点
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1楼 2012-06-27 15:48:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

杭州小月

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biomater at 2012-06-27 17:03:50
红外好像不太方便做液体的，但也不是完全没有方法。
可以用滴加液体到溴化钾里面，烤干后压片，观察！
不晓得高温对你样品有没有影响。。
为何不做成奶粉。。。。

文献上说可以做液体样品，只要有ATR附件就可以了，我现在纠结的是不知道样品是否需要纯化
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4楼2012-06-27 18:58:46
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alikeyzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杭州小月: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-06-28 15:13:14
首先，采用傅里叶红外光谱法测定蛋白质的二级结构，主要可以反应两点问题1.某种蛋白质当中主要的二级结构是什么。2.某种蛋白质当中各二级结构的相对含量（若用傅里叶自推卷曲法self-deconvolution）。3.某种蛋白质在经过处理之后二级结构的变化。因此，如果测定的样品为非纯品，比如说含有多种蛋白质，那么该方法所反映的信息便没有任何价值。
其次，测定采用傅里叶红外光谱法测定蛋白质的二级结构的制样方法通常采用溶液样品，溶剂有纯水与重水（两者各有利弊），就是为了其所检测到的蛋白质的二级结构尽量的接近生理状态下的蛋白质的状态，若用溴化钾压片法的固态制样方法则可能导致蛋白质二级结构的变化。
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It's what you do that defines you.
7楼2012-06-28 09:38:19
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alikeyzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
杭州小月: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-28 15:13:49
针对你得问题：
1.你的样品中需测的蛋白质必须纯化，最低条件是纯化到少数几种蛋白质，比如2-5之间，最好是纯化出一种来。
2.你需要的是条件变化后蛋白质二级结构的变化，直接测牛奶干扰过多，即使是纯水做溶剂在测定时在1700-1600cm-1都会有干扰峰，更不用说是混合物了。
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It's what you do that defines you.
8楼2012-06-28 09:43:15
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biomater

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
杭州小月: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-29 11:12:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by 杭州小月 at 2012-06-27 18:58:46
文献上说可以做液体样品，只要有ATR附件就可以了，我现在纠结的是不知道样品是否需要纯化...

楼下说的DSC多表示宏观的性质，对于二级结构的影响好像并不能测定。蛋白分离下，做结果当然更加精确，这个有什么纠结的。
如果大概晓得里面的成分和几种蛋白的分子量的话，买个超滤的离心管就好了，也不是太难啊！
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焚琴煮鹤岂不快哉。。。。。。
15楼2012-06-28 16:05:07
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普通回帖

biomater

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
杭州小月: 金币+1, ★有帮助 2012-06-28 15:12:37
红外好像不太方便做液体的，但也不是完全没有方法。
可以用滴加液体到溴化钾里面，烤干后压片，观察！
不晓得高温对你样品有没有影响。。
为何不做成奶粉。。。。
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焚琴煮鹤岂不快哉。。。。。。
2楼2012-06-27 17:03:50
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qingheyouyou
3楼2012-06-27 17:41:08
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nancyfood

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
杭州小月: 金币+2, ★有帮助 2012-06-28 15:12:58
红外主要适用于纯化物质分析的。如果你要的是观察加入某物质后牛奶混合物的结构，就可以用，因为会有新的官能团出现。如果你一直观察的就是单品，做红外的意义就不大，因为会有很多干扰的波峰。
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5楼2012-06-27 20:14:14
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杭州小月

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by nancyfood at 2012-06-27 20:14:14
红外主要适用于纯化物质分析的。如果你要的是观察加入某物质后牛奶混合物的结构，就可以用，因为会有新的官能团出现。如果你一直观察的就是单品，做红外的意义就不大，因为会有很多干扰的波峰。

我主要是想看看不同的热处理条件是否会对牛奶蛋白的二级结构产生影响，不知道这样直接测定牛奶是否有意义？请高手指点呀
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6楼2012-06-28 09:21:55
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kuge82

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
杭州小月: 金币+1, ★有帮助 2012-06-28 15:14:02
热对蛋白的影响可以做dsc吧。差式扫描...
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9楼2012-06-28 12:40:59
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kuge82

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

热对蛋白的影响可以做dsc吧。差式扫描...
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10楼2012-06-28 12:41:45
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