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杭州小月

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质二级结构红外测定

求助,哪位虫友用红外光谱仪测过蛋白质的二级结构,是不是必须要求样品是纯品?我想要测定牛奶中蛋白质的二级结构,可不可以用牛奶直接测定?或者需要先把牛奶蛋白纯化?请高手指点
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alikeyzl

木虫 (正式写手)

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杭州小月: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-06-28 15:13:14
首先,采用傅里叶红外光谱法测定蛋白质的二级结构,主要可以反应两点问题1.某种蛋白质当中主要的二级结构是什么。2.某种蛋白质当中各二级结构的相对含量(若用傅里叶自推卷曲法self-deconvolution)。3.某种蛋白质在经过处理之后二级结构的变化。因此,如果测定的样品为非纯品,比如说含有多种蛋白质,那么该方法所反映的信息便没有任何价值。
其次,测定采用傅里叶红外光谱法测定蛋白质的二级结构的制样方法通常采用溶液样品,溶剂有纯水与重水(两者各有利弊),就是为了其所检测到的蛋白质的二级结构尽量的接近生理状态下的蛋白质的状态,若用溴化钾压片法的固态制样方法则可能导致蛋白质二级结构的变化。
It's what you do that defines you.
7楼2012-06-28 09:38:19
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alikeyzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
杭州小月: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-28 15:13:49
针对你得问题:
1.你的样品中需测的蛋白质必须纯化,最低条件是纯化到少数几种蛋白质,比如2-5之间,最好是纯化出一种来。
2.你需要的是条件变化后蛋白质二级结构的变化,直接测牛奶干扰过多,即使是纯水做溶剂在测定时在1700-1600cm-1都会有干扰峰,更不用说是混合物了。
It's what you do that defines you.
8楼2012-06-28 09:43:15
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alikeyzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
杭州小月: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-29 11:11:57
首先,蛋白质的纯度一定要高,要尽量的去除非蛋白质的杂质,否则获得的红外光谱干扰的吸收峰会很多,测定结果就没有任何的意义。
其次,溶剂建议用重水,分析效果一般会好些,通过差谱技术可以消除1700-1600cm-1波段的干扰。
It's what you do that defines you.
13楼2012-06-28 15:59:01
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alikeyzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
杭州小月: 金币+2 2012-06-29 11:12:03
不过,如果能将非蛋白质杂志去除的较为彻底,用高纯度的蛋白质样品,来说明条件变化对牛乳中总蛋白质二级结构的影响,应该还是可行的。
It's what you do that defines you.
14楼2012-06-28 16:02:37
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