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race实验 载体测序 获得的片段不是目的片段
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初次做race实验，在测序方面遇到了好多问题，希望各位高手能帮我分析分析。 1 一个基因连载体后测序一般都送几个菌落呢？我送了两三个菌落，测序结果为什么不一样呢？备注：都可以找到GSP引物和AUAP引物。 2 测序后跟目的基因比对，前100bp可以比对上，后面几百的bp就比对不上了，这是为什么呢？ 3 同一个基因，我已经换了三条GSP内层引物了，每次测序回来都不是我要的基因序列，有什么解决这种问题的办法呢？ 谢谢各位啊！ |
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 生物实验技术与方法 | 测序相关问题 |
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-28 16:02:21
yangcaoqing: 金币+1, 谢谢 我重新设计引物试一下 2012-06-28 17:14:01
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yangcaoqing: 金币+1, 谢谢 我重新设计引物试一下 2012-06-28 17:14:01
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重新设计引物吧。估计你的引物有问题。做RACE前先用兼并引物扩目的片段，如果是基因家族，这些目的片段的序列都不会相同（除去引物），设计RACE引物时，避开原先的引物。内引物与外引物相差100-200bp为妙。 引物设计不好会影响结果。换引物吧。 我一般只送一个菌落。如果你送了3个菌落，测序结果都不一样，只能说明你设计的引物有问题。发生了错配。。。。。 |
6楼2012-06-28 15:14:58
2楼2012-06-27 10:56:44
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 股交流 2012-06-27 13:45:53
yangcaoqing: 金币+5, 终于有人回帖了 谢谢啊 2012-06-27 15:52:33
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yangcaoqing: 金币+5, 终于有人回帖了 谢谢啊 2012-06-27 15:52:33
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3楼2012-06-27 13:13:15
4楼2012-06-27 15:58:25
