24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2395  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yangcaoqing

新虫 (小有名气)


[交流] race实验 载体测序 获得的片段不是目的片段

初次做race实验,在测序方面遇到了好多问题,希望各位高手能帮我分析分析。
1 一个基因连载体后测序一般都送几个菌落呢?我送了两三个菌落,测序结果为什么不一样呢?备注:都可以找到GSP引物和AUAP引物。
2 测序后跟目的基因比对,前100bp可以比对上,后面几百的bp就比对不上了,这是为什么呢?
3 同一个基因,我已经换了三条GSP内层引物了,每次测序回来都不是我要的基因序列,有什么解决这种问题的办法呢?

谢谢各位啊!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物实验技术与方法 测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tulip1213

银虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-28 16:02:21
yangcaoqing: 金币+1, 谢谢 我重新设计引物试一下 2012-06-28 17:14:01
重新设计引物吧。估计你的引物有问题。做RACE前先用兼并引物扩目的片段,如果是基因家族,这些目的片段的序列都不会相同(除去引物),设计RACE引物时,避开原先的引物。内引物与外引物相差100-200bp为妙。
引物设计不好会影响结果。换引物吧。

我一般只送一个菌落。如果你送了3个菌落,测序结果都不一样,只能说明你设计的引物有问题。发生了错配。。。。。
6楼2012-06-28 15:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yangcaoqing

新虫 (小有名气)


木有人理我...
2楼2012-06-27 10:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wcg129

禁虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 股交流 2012-06-27 13:45:53
yangcaoqing: 金币+5, 终于有人回帖了 谢谢啊 2012-06-27 15:52:33
本帖内容被屏蔽

3楼2012-06-27 13:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangcaoqing

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by wcg129 at 2012-06-27 13:13:15
我送了两三个菌落,测序结果为什么不一样呢?备注:都可以找到GSP引物和AUAP引物。
这个可以再提高退火温度试试

还有你扩的基因是什么类型基因,如果是诱导型表达的最好诱导后增强其表达再提取RNA再做

内层扩增我做过梯度检测,每个梯度条带都很明亮而且单一;另外,不是诱导型表达的基因。菌落PCR检测时用的是GSP内层引物和AUAP,扩出来的条带和内层PCR扩增的条带一致。想请教下问题还有可能出在哪里呢?
4楼2012-06-27 15:58:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 3/150 2026-04-19 21:44 by 淡雅人生27
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
信息提示
请填处理意见