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auau96

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间 已有2人参与

大家好  我现在在做酿酒酵母基因敲除  利用左右同源臂各390bp和540bp  因为本身菌株遗传背景不清楚  MARKER基因既不是抗性基因和也不是缺陷型基因     用能表达的酶基因做筛选标记   不知各位前辈是否有此类实验经验来敲除目的基因   
实验顺利大概需多少时间能完成
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lyyjackey

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by auau96 at 2012-06-06 21:10:02
谢谢   设计用的是纤维素酶透明圈筛选   但是做了好几次转化 结果都整合不上去  标记基因进入细胞内 传代几次就丢了    用透明圈筛选也没有圈圈 得结论是未整合上去 基因没敲掉  

不知是不是以为我把PCR产物做转 ...

理论上你这左右臂长度已经可以达到敲除的效果了,做敲除的实验吧,感觉运气成分真的很大,有时候一不小心就敲掉了,我目前也是在做酿酒酵母的敲除实验,希望多多交流啊。
19楼2013-05-23 17:04:07
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lyyjackey

新虫 (小有名气)

请问你做的是什么酿酒酵母的敲除,希望进一步交流。
20楼2013-05-23 17:06:31
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