应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助连接转化质粒提取
51/1返回列表
查看: 1626  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kenhtsjj

木虫 (小有名气)

[求助] 求助连接转化质粒提取

请教一下，在我连接转化以后，菌液PCR能检测到单一的目的条带，但是隔日我提取质粒却提不出来了，我的载体5K，目的片段2k，但是质粒提取是在750-1k之前有一片拖带，没有任何条带，这是为什么呢？？

另外，如何能够提高质粒提取的量？我用的是普通的质粒小提试剂盒，我的提出来都在40ng/μl左右，但是人家都说能达到好几百？请教。谢谢各位！
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

kenhtsjj

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-04 11:37:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kenhtsjj

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by tangyuntao at 2012-12-18 17:31:25
我也遇到相同的问题，感谢楼主，我还是再摇下菌吧。

谢谢，祝实验顺利
回复此楼
9楼2012-12-20 15:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-04 20:08:56
先用成熟质粒试试，提出来效果如何，试剂盒的效率如何，一般试剂盒是没有问题的，质粒提取与你摇菌的浓度，裂解是否彻底，中和是否完全，还有最后一步洗脱的量有关，总之这些条件你的摸索，如果你是做得多了，肯定会积累一些经验 的！
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-04 15:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kenhtsjj

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by smdsfy at 2012-06-04 15:41:32
先用成熟质粒试试，提出来效果如何，试剂盒的效率如何，一般试剂盒是没有问题的，质粒提取与你摇菌的浓度，裂解是否彻底，中和是否完全，还有最后一步洗脱的量有关，总之这些条件你的摸索，如果你是做得多了，肯定会 ...

谢谢！我用这个试剂盒提过的，试剂盒应该没有问题。
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-04 18:38:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanying198

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kenhtsjj: 金币+2, ★有帮助, 我用的是热激，这个操作应该是没有什么问题，再换盒子尝试中~~~谢谢~ 2012-06-10 13:32:10
kenhtsjj: 金币+1 2012-06-10 13:32:50
菌落PCR有时候会产生假阳性。用热激的方法转化，效率应该挺高的，我们一般是直接挑单克隆，然后提取质粒，电泳验证。
提取质粒最重要的是加溶液III，千万不可以剧烈，否则质粒会断裂。个人想法，可以参考。
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-07 21:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭