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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题
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sunnywill

金虫 (正式写手)

[求助] 植物PAL及CAT两种酶测定中遇到的问题已有1人参与

最近在测植物PAL及CAT酶活，遇到了些问题，在此向有经验的高手请教下经验。希望高手能给予详解
PAL测定的方法中有一种是：加苯丙氨酸与酶提取液后，立即保温于30度15分钟后，加200微升6M的HCl终止反应，在于290nm处测定吸光值变化。最终以吸光值每30分钟或每小时变化0.01为一个酶活力单位。
我的疑问是加酸终止反应了，那么吸光值还会有变化吗？是逐渐增加还是减小呢？不应该是固定值吗
而有些方法是不加酸终止反应的，
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1楼2012-06-02 12:10:46
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金文音乐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不知道为什么，我在测的时候发现吸光度是下降的。。。。但是试验方法上写的是因为反应生成了反式肉桂酸而吸光度上升的啊……想问一下各位虫友有没有遇到过这种状况
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7楼2013-06-21 18:36:04
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sunnywill

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

PAL测定中，是每个样品都有对照吗？你指不加样品对照组吸光度值是指不加苯丙氨酸，而用缓冲液代替苯丙氨酸，同样加酶粗提液吗？这样加入有10个植物样品，是就要设10个对照组吗？

我在实验时只设了不加苯丙氨酸，而用缓冲液代替苯丙氨酸的，作为对照调零了，所以没有你所说的两者差值
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5楼2012-06-02 20:49:31
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zyw353

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 金文音乐 at 2013-06-21 18:36:04
不知道为什么，我在测的时候发现吸光度是下降的。。。。但是试验方法上写的是因为反应生成了反式肉桂酸而吸光度上升的啊……想问一下各位虫友有没有遇到过这种状况

请问i你的问题如何解决的？我也遇到了同样的问题。
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10楼2015-08-29 10:06:07
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sunnywill

金虫 (正式写手)
希望亲自做过该实验的高手给予详细解答
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2楼2012-06-02 12:27:04
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sherry_wang

木虫 (正式写手)
不知道楼主的问题解决了没有 我也遇到了同样的问题 求解啊
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6楼2012-12-03 12:50:38
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auntwang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 金文音乐 at 2013-06-21 18:36:04
不知道为什么，我在测的时候发现吸光度是下降的。。。。但是试验方法上写的是因为反应生成了反式肉桂酸而吸光度上升的啊……想问一下各位虫友有没有遇到过这种状况

我的也是下降。请问怎么解决这个问题的啊。

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12楼2017-04-26 15:46:45
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普通回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-02 19:31:54
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变化0.01只是活力单位的定义方式，并非实验过程。
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3楼2012-06-02 16:55:05
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sunnywill

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2012-06-02 16:55:05
你所提到的PAL测定，实际上是在保温15分钟后，测定样品290nm吸光度值，以及不加样品对照组吸光度值，两者差值即吸光度值在15分钟内变化，根据这个计算半小时或一小时变化值并换算为活力单位。那个每半小时或一小时变 ...

多谢啦，原来一直理解的以为吸光值变化0.01为一个酶活力单位是要作动态变化，每隔一定时间测定。
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4楼2012-06-02 20:39:21
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dahuilang_09

新虫 (初入文坛)
以不加酶液做对照调零
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8楼2013-09-30 09:21:09
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优悠心语

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dahuilang_09 at 2013-09-30 09:21:09
以不加酶液做对照调零

那样就消除不了酶液里面的物质对吸光值的影响了
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9楼2015-03-26 08:48:37
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