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fmtzhangli

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[求助] 反转录前 DNA 酶消化

我克隆一段基因大约1800bp，先提取了RNA,RT-PCR测序后，发现含有内含子，可能是DNA污染了，打算用DNA酶消化一下，有没有哪位同学做过类似的实验，具体应该怎么做啊，消化后能不能RNA也降解了？请高手指点~

[ Last edited by fmtzhangli on 2012-5-31 at 11:43 ]

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1楼2012-05-31 11:36:23

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fmtzhangli

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3楼: Originally posted by qdlinxiaofei at 2012-05-31 15:44:40
我用的的是生工的试剂盒，不是很贵，很简单将你的DNARNA提取物融到42.75ul DEPC灭菌水里然后加2ulDNase 5UL BUFFER 0.25 RNA酶抑制剂（40U/UL）37度半个小时我做了十几次了这份方法就失败了一次

这样做完是不是还要让DNA酶失活啊？怎么做呢？

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4楼2012-06-01 15:23:17

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6楼: Originally posted by longrna at 2012-06-02 10:23:26
基本上大的生物公司如life(AB\ambion\invitrogen)、Thermo(farmentas等)、Qiagen等都有用于消化去除RNA中的DNA的DNase I。用法及灭活在protocol里都有写，一般是加热灭活或再用酚氯仿再抽提一次。
此步操作需要非常 ...

谢谢回复，请问灭活时是只用其中一个方法还是两个都要用？这两个方法哪个效果能好点

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7楼2012-06-02 12:25:41

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