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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒酶切没有条带
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skk910416

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切没有条带

质粒跑电泳有条带，然后双酶切之后就什么都没有了，之前菌落菌液pcr都是正确的~
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kai
1楼 2012-05-30 21:48:03
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
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本帖内容被屏蔽
2楼2012-05-30 22:14:47
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lansehaitun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是酶出了问题或者酶切体系中用的水时间久了，建议1、提出的质粒用刚灭不久的超纯水溶解2、换一下酶和buffer试试
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3楼2012-05-31 10:22:47
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skk910416

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-05-30 22:14:47
是不是质粒提取出现问题了

单独跑质粒有条带的呢~酶切之后就什么都没了，质粒提取应该没有问题的，做了2回了
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kai
4楼2012-06-01 10:35:30
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skk910416

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lansehaitun at 2012-05-31 10:22:47
应该是酶出了问题或者酶切体系中用的水时间久了，建议1、提出的质粒用刚灭不久的超纯水溶解2、换一下酶和buffer试试

谢谢哈，明天再提一管质粒换种酶切试试~
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kai
5楼2012-06-01 10:36:33
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芒果布丁

木虫 (小有名气)
建议用单酶切试试，可能是酶或是buffer有问题了
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喵星人~
6楼2012-06-01 10:59:52
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

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是不是把DNA酶当内切酶使用了呢？
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7楼2012-06-01 11:07:54
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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质粒浓度时多大？酶切后上样量是多少？是不是因为浓度太低了看不出来
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
8楼2012-06-02 10:37:22
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2012-06-02 21:14:21
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skk910416

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by wcwluwei at 2012-06-02 21:14:21
这情况真是无解，你的酶切体系质粒加的多少，还有你提的质粒浓度高不高...

问题解决啦，第二天换了新的酶还有水然后提了新的质粒就好了
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kai
10楼2012-06-02 22:39:45
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