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viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 关于镍柱纯化蛋白

我蛋白样品挂镍柱后,,用含200mM米错液洗脱,这样米错不是挂在镍柱上了吗,下次使用时。我的样品怎么还能在挂上去?
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good! 2012-05-25 17:33:19
viki_MDK: 金币+5 2012-05-25 18:06:28
这就是涉及到柱子再生平衡的问题了。
你可以直接用纯水冲洗5-10个柱体积就行了。咪唑就冲下来了。要是长久不用的再换上20%的乙醇保存就行了。
楼上说的都是重新挂ni的方法,其实只要在柱子载量不降低的情况下没必要重复挂柱。毕竟重复挂柱还是没有原装的好的。
给你篇GE参考文献看看。

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  • 附件 1 : Ni柱使用.pdf
  • 2012-05-25 17:21:57, 352.6 K
  • 附件 2 : HisTrap-FF.pdf
  • 2012-05-25 17:22:05, 98.27 K
6楼2012-05-25 17:22:48
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查看全部 11 个回答

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-25 19:07:43
把柱子再生一下就是了,亲和的我没有做过,但是离子交换的,在做完以后,都要用NAOH溶液冲洗,你看看说明吧
2楼2012-05-25 13:45:32
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励 2012-05-25 19:07:50
(咪唑在215nm有较高的吸收)咪唑洗脱完后用水冲,开始在215nm的吸收会很高的,用水多冲会,紫外吸收会降下,说明咪唑冲干净了。
3楼2012-05-25 13:57:53
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

用咪唑洗脱的Ni柱是可重复使用几次之后再重新挂Ni再生的。
4楼2012-05-25 14:03:56
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